小鼠核因子κB受体活化因子（RANK）ELISA试剂盒

商品属性

预期用途

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法，定量检测小鼠血清、血浆或细胞培养上清等样本中的RANK浓度，仅供科研使用，不适用于临床诊断。

实验原理

包被：抗小鼠RANK单克隆抗体预包被于96孔板。

结合：样本中的RANK与包被抗体结合，形成固相复合物。

检测：依次加入生物素化检测抗体、辣根过氧化物酶（HRP）标记的链霉亲和素，形成“抗体-抗原-抗体-酶”复合物。

显色：加入TMB底物后，在HRP催化下显蓝色，终止反应后转为黄色，OD450 nm吸光度与RANK浓度呈正比。

试剂盒组成

| 组分 | 规格/数量 | 保存条件 |

| 预包被酶标板 | 96孔（可拆卸） | 2–8℃干燥保存 |

| RANK标准品（冻干） | 2瓶（4,000 pg/mL）| -20℃ |

| 生物素化检测抗体 | 1瓶（120 μL） | -20℃避光 |

| HRP-链霉亲和素 | 1瓶（120 μL） | -20℃避光 |

| 显色液（TMB） | A/B液各6 mL | 2–8℃避光 |

| 20×浓缩洗涤缓冲液 | 25 mL | 室温 |

| 终止液（2M H₂SO₄） | 6 mL | 室温 |

样本处理

血清/血浆：采集后离心去除颗粒物，-20℃分装保存，避免反复冻融。

细胞上清：离心去除沉淀后检测。

标准曲线范围

梯度稀释标准品至以下浓度：

2,000 pg/mL、1,000 pg/mL、500 pg/mL、250 pg/mL、125 pg/mL、62.5 pg/mL、31.25 pg/mL，零孔为样本稀释液。

操作步骤

复温：试剂盒室温平衡30分钟。

稀释：用样本稀释液重建标准品，系列稀释后加入对应孔（50 μL/孔）。

加样：待测样本10 μL + 稀释液40 μL（1:5稀释），混匀后加至样本孔。

孵育：37℃反应60分钟，洗板5次。

显色：依次加入检测抗体、酶结合物、TMB，避光反应15分钟，终止后30分钟内检测OD值。

注意事项

避免试剂接触金属离子或氧化剂。

不同批次组分不可混用。

显色时间需严格控制，避免过度反应。

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