大鼠白细胞介素6(IL-6)elisa试剂盒

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1. 检测原理

采用双抗体夹心ELISA技术，特异性识别大鼠IL-6单体（21kDa）和四螺旋束结构。预包被抗大鼠IL-6单抗（识别N端结构域）捕获样本中的IL-6，生物素标记的二抗（识别C端表位）通过链霉亲和素-HRP系统催化TMB显色，450nm吸光度值与IL-6浓度呈正相关。

 2. 核心组分

组分  规格  保存条件  关键特性

预包被板  96T  2-8℃（含干燥剂）  高亲和力（Kd=0.08nM）

重组标准品  0-2000pg/mL  -20℃  冻干粉，比活性≥1×10 U/mg

生物素-抗体  100μL  -20℃（避光）  识别IL-6受体结合域

细胞刺激鸡尾酒  1mL  -20℃  LPS（1μg/mL）+IL-1β（10ng/mL）

血清替代基质  15mL  4℃  消除异嗜性抗体干扰

3. 性能参数

检测范围：15.6-1000pg/mL（可扩展至5000pg/mL）

灵敏度：4.3pg/mL（基于2.5SD空白值）

样本兼容性：

最佳：炎症模型血清（内毒素血症）

适用：脑脊液（需1:2稀释）、脂肪组织匀浆

交叉反应：

大鼠IL-6：100%

小鼠IL-6：78%

人IL-6：<0.01%

精密度：

批内CV：3.5-5.8%

批间CV：6.2-8.9%

4. 样本处理规范

4.1 炎症模型血清采集

LPS（5mg/kg）腹腔注射

6小时后心脏穿刺取血

4℃静置1小时后离心（2000×g，20分钟）

4.2 脂肪组织处理

取附睾脂肪垫100mg

加入900μL含1% Triton X-100的裂解液

超声破碎（冰浴，20kHz，3×10秒脉冲）

4.3 保存稳定性

血清：-80℃保存6个月（回收率>95%）

组织匀浆：液氮速冻后-80℃保存

5. 实验操作要点

标准曲线制备

梯度稀释：0、15.6、31.2、62.5、125、250、500、1000pg/mL

复溶液：含0.5% BSA的PBS

关键步骤控制

孵育条件：37℃恒温振荡（250rpm）

洗板液：含0.1% Tween-20的Tris-HCl（pH7.4）

显色终止：2N HCl（终止更彻底）

质控标准

空白OD值：<0.05

最高标准点OD值：≥2.0

钩状效应检测：样本稀释平行性试验

6. 主要应用方向

急性期反应：内毒素休克模型监测

代谢炎症：肥胖相关低度炎症

神经炎症：脑创伤后小胶质细胞激活

骨代谢研究：破骨细胞分化调控

7. 注意事项

实验设计

推荐采样时间：刺激后3-12小时（峰值窗口）

必须设置：正常对照、模型对照、处理组

干扰控制

避免使用溶血样本（Hb>0.2mg/mL）

高血脂样本需超离（12000×g，30分钟）

数据分析

推荐曲线拟合：五参数logistic模型

异常值标准：超出标准曲线±15%

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