大鼠Total GLP-1elisa试剂盒

1. 检测原理

本试剂盒采用双抗体夹心ELISA法，可同时检测活性GLP-1（7-36 amide）和失活GLP-1（9-36 amide），特异性识别GLP-1的N端和C端表位。微孔板预包被抗GLP-1单克隆抗体，样本中的GLP-1与抗体结合后，加入酶标二抗形成复合物，通过TMB显色系统定量检测。

 2. 试剂盒组成

组分  规格  保存条件

预包被微孔板  96孔  2-8℃（干燥）

GLP-1标准品  0-200 pM  -20℃（冻干）

酶标二抗  120 μL  -20℃

DPP-IV抑制剂  1 mL  -20℃

TMB底物  10 mL  2-8℃（避光）

终止液  10 mL  室温

血浆预处理液  10 mL  -20℃

3. 技术参数

检测范围：2-200 pM（0.6-60 pmol/L）

灵敏度：0.5 pM（0.15 pmol/L）

样本类型：血浆（EDTA抗凝）、肠组织匀浆

检测时间：4.5小时（含样本预处理）

交叉反应：

100% GLP-1（7-36 amide）

100% GLP-1（9-36 amide）

<0.1% GLP-2、GLP-2、GIP

4. 样本采集与处理

血浆采集：

使用含DPP-IV抑制剂（试剂盒提供）的EDTA管采集

立即冰浴，4℃ 1000×g离心10分钟

分装后-80℃保存（避免反复冻融）

组织处理：

肠组织（回肠末端）按1:9（w/v）加入酸性乙醇提取液

4℃匀浆后离心（12000×g，15分钟）

取上清立即检测或-80℃保存

5. 实验步骤

样本预处理（血浆）：

加入预处理液（1:1体积比）

4℃孵育30分钟

12000×g离心15分钟

标准品复溶：

用标准品稀释液配制0、2、5、10、20、50、100、200 pM梯度

检测流程：

加样100 μL/孔（标准品/样本）

4℃过夜孵育（16-20小时）

洗板6次

加酶标二抗（100 μL/孔）

室温孵育2小时

TMB显色（精确控制20分钟）

终止反应后立即检测（450nm/630nm）

6. 应用领域

糖尿病研究：GLP-1分泌动态监测

减重手术研究：胃肠激素变化评估

肠道内分泌研究：L细胞功能分析

GLP-1类似药物：药效学评价

7. 注意事项

关键控制点：

必须使用DPP-IV抑制剂（防止GLP-1降解）

显色时间需精确控制（±30秒）

建议使用多通道移液器操作

数据解读：

正常空腹血浆GLP-1：5-15 pM

餐后峰值：20-50 pM

异常值需复查预处理步骤

特殊说明：

不适用于尿液检测

高脂血症样本需超速离心处理

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