大鼠B7-H1/PD-L1elisa试剂盒

一、试剂盒核心信息

检测目标：大鼠B7-H1/PD-L1（CD274），一种免疫检查点蛋白，通过结合PD-1抑制T细胞活性，参与免疫逃逸。

方法学：双抗体夹心ELISA，特异性检测可溶性PD-L1（检测波长450 nm）。

适用样本：血清、血浆（EDTA/肝素抗凝）、细胞培养上清液（需离心去除碎片）、组织匀浆液（建议添加蛋白酶抑制剂）。

 二、关键组分与性能特点

1. 主要组分

预包被板：抗大鼠PD-L1单克隆抗体包被的96孔板（部分品牌提供可拆卸条板）。

标准品：重组大鼠PD-L1（浓度梯度通常为10–2000 pg/mL，覆盖低丰度检测需求）。

检测系统：生物素-链霉亲和素放大系统（高信噪比），TMB显色。

辅助试剂：洗涤缓冲液（含Tween-20）、终止液（2M HSO）。

2. 性能参数

灵敏度：最低检测限可达5 pg/mL（高灵敏度版本可至1 pg/mL）。

特异性：不交叉反应大鼠PD-L2、B7-H3等同家族蛋白。

稳定性：未开封试剂盒4℃保存有效期至2026年（标准品需-80℃保存）。

三、实验流程与优化建议

1. 简化步骤

① 样本预处理（离心去除颗粒物，稀释至线性范围内）→ ② 加样孵育（37℃ 1.5小时）→ ③ 洗涤5次→ ④ 加二抗孵育（30分钟）→ ⑤ 显色（避光15分钟）→ ⑥ 终止后30分钟内读数。

2. 关键注意事项

样本保存：避免反复冻融（推荐分装后-80℃保存，仅冻融1次）。

干扰排除：高浓度血红蛋白（>10 mg/mL）或甘油三酯（>3 mg/mL）需稀释后验证。

标准曲线：建议使用四参数逻辑（4PL）拟合，确保低浓度区准确性。

四、应用场景

肿瘤免疫研究：评估肿瘤微环境中PD-L1表达水平与免疫治疗响应关系。

自身免疫疾病：如大鼠类风湿性关节炎模型中PD-L1/PD-1通路调控机制。

感染免疫：慢性病毒感染（如LCMV）的免疫耗竭研究。

五、时效性提示

技术更新：2025年部分品牌推出“快速版”（90分钟完成检测），适合高通量筛选。

替代方案：若需检测膜结合型PD-L1，建议结合流式细胞术或免疫组化。

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