脯氨酸脱氢酶(ProDH)测定试剂盒/微量法/96样

脯氨酸脱氢酶(ProDH)测定试剂盒/微量法/96样

测定意义：

ProDH 是存在于线粒体内的催化脯氨酸降解的关键酶。脯氨酸是分布最广泛的一种渗透物质，在胁迫条件下很多植物可以通过增加合成、减少降解而在体内累积大量脯氨酸，降低 ProDH 活性对于调节渗透平衡、防止渗透胁迫对植物造成伤害、清除自由基、保护细胞结构具有重要意义。

测定原理：

利用异硫氰酸甲酯检测 ProDH 催化的脱氢反应，600nm 处吸光值的吸光值的变化反映酶活性的高低。

需自备的仪器和用品：

可见分光光度计/酶标仪、台式离心机、可调式移液器、微量石英比色皿/96 孔板、研钵、冰和蒸馏水。

测定步骤：

1、分光光度计或酶标仪预热 30min 以上，调节波长至 600nm，蒸馏水调零。

2、样本测定

(1)混合液的配制：首先将试剂三和试剂四配成溶液（见试剂的组成和配制），临用前根据用量按照试剂二（V）：试剂三（V）：试剂四（V）=2.4（mL）：0.3（mL）：0.3（mL）的比例充分混匀。（注意：现配现用，用多少配多少），置于 30℃水浴 5min；

(2)试剂五的配制：取试剂五一支，临用前加入 500μL 蒸馏水充分溶解待用，现配现用。

(3)在微量石英比色皿或 96 孔板中加入 35μL 样本、15μL 试剂五和 150μL 混合液，混匀，立即记录600nm 处初始吸光值 A1 和 10min 后的吸光值 A2 ，计算 ΔA=A2-A1。

注 意：

正式测定前务必取 2-3 个预期差异较大的样本做预测定。