人永生化表皮细胞/角质形成细胞+LUC；hacat+LUC

                                                           人永生化表皮细胞/角质形成细胞+LUC；hacat+LUC
产品信息：

人永生化表皮细胞/角质形成细胞+LUC（HaCaT+LUC）是一种经过基因改造的细胞系，源自正常成人皮肤的角质形成细胞，通过转染荧光素酶（Luciferase, LUC）基因，使其能够表达荧光素酶，从而用于生物发光成像和相关研究。以下是其详细说明、培养操作和特性：

特性/操作   详细信息

细胞来源与特性   源自一位62岁患有黑色素瘤男性的病灶外围正常皮肤，经体外培养后自然转化为人永生化角质形成细胞（HaCaT），具有无限增殖能力，保留角质形成细胞分化特性，但不具有致瘤性。

通过基因工程手段转入荧光素酶（Luciferase, LUC）基因，可在特定底物（如荧光素）存在下发出生物荧光，用于实时监测细胞活性、基因表达或信号通路研究。

细胞呈上皮细胞样形态，贴壁生长，表达角蛋白等角质形成细胞标志物。

培养基   DMEM高糖培养基，添加10%胎牛血清（FBS）和1%青霉素-链霉素（PS）。

培养条件   37℃、5% CO、饱和湿度。

传代方法   细胞密度达80%-90%时进行传代。

用0.25%胰蛋白酶-0.53mM EDTA消化1-3分钟，显微镜下观察细胞变圆脱落即终止消化。

离心收集细胞，按1:2至1:4比例分瓶传代。

冻存与复苏   冻存液为90%FBS+10%DMSO，程序降温后液氮保存。

复苏时37℃水浴快速解冻，加入完全培养基稀释DMSO，离心后重悬接种。

应用领域   用于皮肤生物学、氧化应激、细胞增殖与凋亡等领域的机制研究。

通过荧光素酶报告系统，可用于基因表达调控、信号转导、药物筛选及细胞间相互作用等研究。

HaCaT+LUC细胞系因其永生化特性、荧光素酶报告系统和易于培养的特点，成为研究皮肤生物学和相关疾病机制的重要工具。在培养过程中，需注意维持适宜的培养条件和操作规范，以确保细胞的正常生长和荧光素酶活性。

基本操作步骤：

原代培养：取材→分离→培养，需保持材料新鲜及严格无菌2。

传代培养：贴壁细胞需胰酶消化，悬浮细胞可直接传代，离心后重悬分瓶23。

冻存与复苏：使用含10%DMSO的冻存液，程序降温后液氮保存；复苏时快速37℃水浴解冻。

培养操作要点：

基础培养基选择：分为天然培养基、合成培养基（如DMEM、RPMI 1640）和无血清培养基45。目前以合成培养基和无血清培养基使用居多。

培养条件设置：

温度：多数人和哺乳动物细胞为36-37℃，昆虫细胞为27℃。

pH值：多数哺乳动物细胞为7.4，昆虫细胞为6.2。

CO₂浓度：通常维持5-7% CO₂，多数细胞适合5% CO₂气氛。

渗透压：控制在260-320mOsm/kg为宜。

公司正在出售的产品：

具体特点如下：

环境与营养：需无菌环境、精确的温度（36-37℃）和pH（7.2-7.4），动物细胞常需血清，植物细胞需激素。

生长方式：贴壁细胞需表面附着，悬浮细胞自由漂浮，半贴壁半悬浮兼具两者特性。

传代与密度：贴壁细胞需胰酶消化传代，悬浮细胞直接分瓶；密度达80%-90%时需传代，避免营养枯竭与代谢抑制。

敏感性：对剪切应力、污染、温度变化敏感，需定期更换培养液清除代谢物。

应用与局限：便于活细胞观察与实验控制，但体外环境与体内存在差异，长期传代可能导致遗传不稳定与去分化。