重组蛋白酶K

碧云天生产的Recombinant Proteinase K (重组蛋白酶K)，是一种不含动物源性物质的(animal origin-free, AOF)的蛋白酶K，通过毕赤酵母(Pichia pastoris)发酵并纯化获得。

Proteinase K，也称protease K或endopeptidase K，中文名为蛋白酶K或肽链内切酶，CAS号为39450-01-6，属于一种广谱的丝氨酸蛋白酶，可被某些丝氨酸蛋白酶的抑制剂如PMSF、AEBSF等所抑制。蛋白酶K无明显的切割特异性，能在脂肪族、芳香族或疏水性氨基酸的羧基侧裂解肽键，可被蛋白酶K水解的最小的肽是四肽。蛋白酶K对天然蛋白质的酶切降解非常有效，因此常用于在核酸分离过程中快速灭活内源RNA酶、DNA酶等核酸酶，并消化核酸结合蛋白等。本重组蛋白酶K的基因序列来源于林伯氏白色念球菌(Tritirachium album Limber)的蛋白酶K基因。

本重组蛋白酶K应用广泛。用于各种常见的分子生物学、细胞生物学等相关实验时消化各种蛋白，例如基因组DNA抽提、酶的消化去除、制备原位杂交组织切片、提高PCR产物的克隆效率等。

本蛋白酶K不含DNase，不含RNase，无核酸残留。

本重组蛋白酶K稳定性好。本重组蛋白酶K酶粉末在-20℃保存一年，酶活下降不超过2%；在25℃保存4个月，酶活下降均不超过4%。

本重组蛋白酶K活性高、纯度高。本重组蛋白酶K酶活力≥30U/mg，纯度≥95% (电泳)，分子量约为28.9kDa。在pH7.5、37℃，以血红蛋白为底物，1分钟内可以产生相当于1微摩尔酪氨酸Folin阳性的氨基酸或多肽的蛋白酶K的量，定义为一个单位蛋白酶K酶活力。

本重组蛋白酶K在很宽的pH范围内有效。有效的pH范围为pH4.0-12.5，pH范围为pH7.5-8.0。

本重组蛋白酶K的反应温度为65℃，但在65℃或更高温度时，蛋白酶K自身也会非常迅速地降解。很多时候反应温度选择50-55℃。

在0.2-1% SDS或约10mM尿素存在的情况下，蛋白酶K显示更高的酶活性。蛋白酶K的常用工作浓度为0.05-1mg/ml，根据所用缓冲液是否含有SDS、尿素、pH是否适合、温度是否适合等因素确定具体的工作浓度。

常用浓度的EDTA、Triton X-100、Tween 20、Sarkosyl、盐酸胍对蛋白酶K的活力影响不大。