蛋白酶K 39450-01-6

基础介绍

蛋白酶k是一种枯草蛋白酶类的高活性蛋白酶，用于生物样品中蛋白质的一般降解。从林伯氏白色念球菌（tritirachiumalbumlimber）中纯化得到。据资料显示：该酶有两个ca2+结合位点，它们离酶的活性中心有一定距离，与催化机理并无直接关系。然而，如果从该酶中除去ca2+，由于出现远程的结构变化，催化活性将丧失80%左右，但其剩余活性通常已足以降解在一般情况下污染酸制品的蛋白质。

蛋白酶k作为一种蛋白酶可以起到消化和降解其他蛋白的作用，但同时其本身也是一种蛋白质。和大部分的蛋白质一样，其活性和稳定性也受到温度、ph值、保存时间等因素的影响，因此，通常蛋白酶k冻干的干粉在0～4℃保存，或溶液状态下于-20℃保存。而现有的蛋白酶k冻干工艺仍有不足，需要花费的时间太长，影响其蛋白酶k冻干产品的生产。为了解决蛋白酶k的运输和应用不便，缩短冻干的时间，加强蛋白酶k干粉的稳定性、延长其保存期等问题，非常有必要需要一种新的冻干工艺流程。[1]

抑制剂

蛋白酶K是一种丝氨酸蛋白酶，因此可以用苯甲基磺酰氟抑制其作用，苯甲基磺酰氟是一种丝氨酸蛋白酶的抑制剂。

主要作用

蛋白酶K在原位杂交技术中通常用于杂交前的处理，它具有消化包围靶DNA蛋白质的作用，以增加探针与靶核酸结合的机会提高杂交信号。但蛋白酶K的浓度过高、消化时间过长或孵育温度过高时都会对细胞的结构有一定的破坏，导致组织切片的脱落细胞核的消失，从而影响杂交结果。EDTA缓冲液可以替代蛋白酶K的作用解决上述出现的问题，并能达到理想的染色效果。[2]

保存方法

保存：保存在－20℃冰箱里，避免反复冻融，有效保证12月。

孵育温度为55至65℃，理想孵育温度为58℃，孵育时间为15分钟至48小时；理想孵育时间为2小时。

主要应用

蛋白酶K已广泛应用在皮革、毛皮、丝绸、医药、食品、 酿造等方面。皮革工业的脱毛和 软化已大量利用蛋白酶，既节省时间，又改善劳动卫生条件。蛋白酶还可用于 蚕丝脱胶、肉类嫩化、酒类澄清。临床上可作药用，如用胃蛋白酶治疗消化不良，用酸性蛋白酶治疗支气管炎，用弹性蛋白酶治疗脉管炎以及用胰蛋白酶、 胰凝乳蛋白酶对外科化脓性创口的净化及胸腔间浆膜粘连的治疗。加酶洗衣粉是 洗涤剂中的新产品，含碱性蛋白酶，能去除衣物上的血渍和蛋白污物，但使用时注意不要接触皮肤，以免损伤皮肤表面的蛋白质，引起皮疹、湿疹等过敏现象。[3]