胆固醇氧化酶（COD）

　　技术指标

　　外观：黄色无定型冻干粉末；蛋白纯度：≥90%；比活性：≥8U/mg酶粉；过氧化氢酶：≤0.001%；胆固醇酯酶：≤0.01%；葡萄糖氧化酶：≤0.01%；ATP酶：≤0.005%

　　酶学性质

　　来源：微生物，胆固醇氧化酶；分类：EC1.1.3.6；分子量：60kDa(SDS-PAGE)；等电点：5.6；Km值：3.3×10-4M(Cholesterol)；抑制剂：SDS，Ag+，Zn2+，Hg2+；最适pH：7.0；最适温度：50℃；pH稳定性：pH5.5-10(25℃,16h)；热稳定性：40℃以下稳定（pH7.0,30min）；稳定性：-20℃静置保存12个月保持90%以上活性；保护剂：BSA以及非离子型表面活性剂。

　　用途：用于高、低密度脂蛋白胆固醇试剂的研发和大量配制。

　　酶活定义：单位酶活定义为在下述条件下，每分钟催化生成1μmolH2O2所需的酶量。

　　试剂准备

　　试剂I：0.1M磷酸钾缓冲液，pH6.5。

　　试剂II：在500ml烧杯中加入5mLTritonX-100和0.5g胆固醇，用保鲜膜密封，用微波炉加热至胆固醇完全溶解。缓慢加入90mL双蒸水，加热并使其沸腾30-60s，溶液将变浑浊。用自来水淋洗使溶液冷却，冷却后的溶液会变澄清，若冷却后未变澄清则需要重新加热使其完全溶解。在澄清的溶液中加入0.4胆酸钠，用双蒸水定容至100mL。定容后用0.22um滤膜过滤，此溶液在室温下一周内稳定。如果该溶液变浑浊，可轻微加热使其澄清。

　　试剂III：纯水配制100U/mLPOD。

　　试剂IV：50mM4-AA溶液（1.016g4-AA溶于100mLUP水）。

　　试剂V：50mMTOOS溶液（1.477gTOOS溶于100mLUP水）。

　　酶稀释液：20mM磷酸钾缓冲液，pH7.0，含0.2%BSA。

　　样品：用酶稀释液将酶稀释至0.05-0.2U/mL。

　　操作步骤

　　1.将反应混合物置于37℃水浴锅预热；

　　2.向1mL比色皿中加入0.9mL反应混合物。

　　3.向反应混合物中加入0.1mL待测酶液，混匀。

　　4.37℃反应，用分光光度计在555nm检测样品1min内的吸光度变化（ΔAs）