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谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase, GR)说

glutathione
1500 1盒 起订
上海 更新日期:2024-12-23

上海雅吉生物科技有限公司

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产品详情:

中文名称:
谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase, GR)说
英文名称:
glutathione
CAS号:
保存条件:
2-8℃
产品类别:
试剂盒 生化试剂盒

谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase, GR)说明书

                                           分光光度法50/48

 

    意:正式测定之前选择2-3个预期差异大的样本做预测定。

谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase, GR)说测定意义:

GR是广泛存在于真核和原核生物中的一种黄素蛋白氧化还原酶,是谷胱甘肽氧化还原循环的关键酶之一(通常昆虫中GRTrxR取代)。GR催化NADPH还原GSSG生成GSH,有助于维持体内GSH/GSSG比值。GR在氧化胁迫反应中对活性氧清除起关键作用,此外GR还参与抗坏血酸-谷胱甘肽循环途径。


测定原理:

GR能催化NADPH还原GSSG再生GSH,同时NADPH脱氢生成NADP+NADPH340 nm有特征吸收峰,相反NADP+在该波长无吸收峰;通过测定340 nm吸光度下降速率来测定NADPH脱氢速率,从而计算GR活性。


自备仪器和用品

紫外分光光度计、低温离心机、水浴锅、移液器、1mL石英比色皿和蒸馏水


试剂组成和配置:

试剂一:液体100mL×14℃保存。

试剂:粉剂×2瓶,-20℃保存。临用前加入3 mL蒸馏水,混匀。

试剂:粉剂×2-20℃保存。临用前加入1.5 mL蒸馏水,混匀。


粗酶液提取:

1. 组织:按照组织质量(g:提取液体积(mL)15~10的比例(建议称取约0.1g组织,加入1mL试剂一)进行冰浴匀浆。8000g4离心15min,取上清,置冰上待测。

 

2. 细菌、真菌:按照细胞数量(104个):提取液体积(mL)为500~10001的比例(建议500万细胞加入1mL试剂一),冰浴超声波破碎细胞(功率300w,超声3秒,间隔7秒,总时间3min);然后8000g4,离心15min,取上清置于冰上待测。

 

3. 血清等液体:直接测定。


谷胱甘肽还原酶(glutathione reductase, GR)说操作步骤

1. 分光光度计预热30 min,调节波长到340 nm,蒸馏水调零。

2. 试剂一置于25℃(普通物质)或者37℃(哺乳动物)中预热30min

3. 测定管:取1mL石英比色皿,依次加入50μL试剂三,100μL试剂二, 750μL试剂一100μL上清液,混匀,340nm迅速测定初始吸光度180 s吸光度,记为A1A2,△A测定管= A1A2(注意 加完上清液后迅速混匀测定)


计算公式

 

(1). 按蛋白浓度计算

活性单位定义:在一定温度中,pH8.0条件下,每毫克蛋白每分钟催化1nmol NADPH氧化1个酶活单位

GR酶活(nmol/min/mg prot)= [ A测定管÷ε÷d×V反总×109]÷[Cpr×V]÷T

= 536×A测定管÷Cpr

(2). 按样本质量计算

活性单位定义:在一定温度中,pH8.0条件下,每克样本每分钟催化1nmol NADPH氧化1个酶活单位

GR酶活(nmol/min/g 鲜重)= [ A测定管÷ε÷d×V反总×109] ÷(W×V÷V样总)÷T

= 536×A测定管÷W

(3) 按细胞数量计算

活性单位定义:在一定温度中,pH8.0条件下,每104个细胞每分钟催化1nmol NADPH氧化1个酶活单位

GR酶活(nmol/min/104 cell)= [ A测定管÷ε÷d×V反总×109] ÷(细胞数量×V÷V样总)÷T            

= 536×A测定管÷细胞数量

4)按液体体积计算

活性单位定义:在一定温度中,pH8.0条件下,每毫升液体每分钟催化1nmol NADPH氧化1个酶活单位

GR酶活(nmol/min/mL)= [ A测定管÷ε÷d×V反总×109]÷×V÷T

= 536×A测定管

εNADPH摩尔消光系数6.22×103L/mol/cmV反总:反应体系总体积,1000μL=0.001 L1061 mol=1×106μmol Cpr:上清液蛋白浓度(mg/mL);V样:加入反应体系中上清液体积,100μL =0.1 mLV样总:加入提取液体积,1mLW,样本质量,gT:反应时间,3 min


注意事项:

1)样品处理等过程均需要在冰上进行,且须在当日测定酶活力,匀浆液避免反复冻融;

2)试剂二和试剂三须现配现用,配制完后,置于冰上,未使用完的4保存,三天内使用完。

3)测定前须先用12个样做预实验,哺乳动物组织一般须用试剂一稀释25

4)细胞中GR活性测定时,细胞数目须在300-500万之间,细胞中GR的提取时可加试剂一后研磨或超声波处理,不能用细胞裂解液处理细胞。


谷胱甘肽还原酶(glutathione ;谷胱甘肽还原酶(glutathione ;

公司简介

上海雅吉生物科技有限公司成立于2011年3月,是一家面向生命科学领域,提供科研类试剂、耗材、仪器、技术服务的生物企业。包括分子生物学、免疫学、微生物学、细胞学等 。旗下拥有 “雅吉生物”、“晶风生物”、“彩佑实业”、“GTX” 品牌。通过公司各部门员工的共同努力在行业内拥有较高知名度,深得新老客户厚爱,本着“优质、服务、信誉”的精神,坚持以优良的技术、优质的产品、良好的信誉为国内外广大用户提供优质生物产品和服务。 公司在重视产品质量的同时,也建立了一套集技术支持,物流售后服务等多部门联动服务体系,努力把我们方便、快捷、周到的服务提供给每一个客户,雅吉生物的试剂盒,在国内众多重点实验室广泛使用,深受广大科研人员好评,先后在权威杂志文章中被引用。 本公司郑重承诺:质量保证、供货及时、服务周到。

成立日期 (14年)
注册资本 50.000000万人民币
员工人数 50-100人
年营业额 ¥ 100万以内
经营模式 试剂,定制,试剂,定制
主营行业 抗体,抗体

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