还原型谷胱甘肽(GSH)测试盒

还原型谷胱甘肽(GSH)测试盒

产品介绍：

研究意义：

GSH是细胞内最主要的抗氧化巯基物质，在抗氧化、蛋白质巯基保护和氨基酸跨膜运输等中具有重要作用。还原型与氧化型比值（GSH/GSSG)是细胞氧化还原状态的主要动态指标。因此，测定细胞内GSH和GSSG含量以及GSH/GSSG比值，能够很好地反映细胞所处的氧化还原状态。

测定原理：

DTNB与GSH反应生成复合物，在412nm处有特征吸收峰；其吸光度与GSH含量成正比。

自备仪器和用品：

低温离心机、水浴锅、可调节移液器、可见分光光度计/酶标仪、微量玻璃比色皿/96孔板、和蒸馏水。

检测原理：

巯基特异性反应原理：GSH 分子上游离‑SH 基团可与 DTNB (5,5‑二硫‑2‑硝基苯甲酸) 发生反应。

显色产物生成原理：DTNB 被巯基还原生成黄色的 2‑硝基‑5‑硫代苯甲酸 (TNB)。

比色检测原理：412 nm 测定黄色产物吸光度，吸光度与样本 GSH 含量正相关。

标准曲线定量原理：GSH 标准品梯度绘制曲线，计算样本还原型谷胱甘肽浓度。
公司正在出售的产品：

操作步骤：

标准曲线绘制：

取6支试管，分别加入0、0.2、0.4、0.6、0.8、1.0mL标准系列溶液，补加提取液至1mL。

每管加入2mL底物缓冲液，37℃水浴预热5分钟。

加入0.5mL显色剂，混匀后37℃水浴准确反应10分钟。

立即加入2mL终止液终止反应，于405nm波长下测定吸光度，以标准品浓度为横坐标，吸光度为纵坐标绘制标准曲线。

样本检测：

取1mL待测样本（若样本活性过高，需用提取液稀释），加入2mL底物缓冲液，37℃水浴预热5分钟。

加入0.5mL显色剂，混匀后37℃水浴准确反应10分钟。

立即加入2mL终止液终止反应，于405nm波长下测定吸光度，根据标准曲线计算样本中β-GAL活性。

微量酶标仪法操作步骤

加样：在96孔板中设置空白孔、标准孔、样本孔，每孔加50μL对应溶液。

反应：每孔加入100μL底物缓冲液，37℃孵育30分钟。

终止：每孔加入50μL终止液。

读数：用酶标仪在405nm波长下测定吸光度，计算酶活性。