siRNA转染试剂

siRNA 转染试剂 Omifection-R

一、产品简介。

Omifection-R 是一款专门用于 siRNA 转染的试剂，转染效率高，细胞毒性低，在多种细胞系及原代细胞中都表现出良好的转染效果。

二、运输与存储条件。

本产品常温运输， 4℃ 保存、严禁冻存。

三、特点与优势。

1. 转染效率高。与 Lipofectamine 2000 或 RNAi Max 等转染试剂的转染效率类似。

2. 细胞毒性低。在多种类型的细胞转染实验中，Omifection-R 没有表现出细胞毒性。

3. 使用方便。本产品不受血清和抗生素的影响，转染前不用更换细胞培养液。

四、使用说明。

1. 以 6 孔细胞培养板培养的贴壁细胞为实验体系，转染实验流程如下：

2. 细胞培养。胰酶消化法收集细胞并计数，接种到 6 孔细胞培养板，培养 24 h 后细胞密度达到30%-50%。（细胞密度太大不利于转染）

3. siRNA 制备。利用 RNase-free ddH2O 溶解 siRNA 干粉，终浓度为 20 μM，即利用 125 μL 的RNase-free ddH2O 溶解 1 OD（33 μg 或 2.5 nM）siRNA 干粉，充分震荡（vortex）使其溶解。

4. 转染复合体制备。准备 2 个无菌 EP 管，各加入 100 μL OPTI-MEM 培养液 (Gibco），其中一管加入 6 μL Omifection-R，混合 10 次，室温静置 5 min。另外一管加入 6 μL siRNA（20 μM）溶液，混匀。将 Omifection-R 混合液滴加到 siRNA 混合液中，混匀，室温静置 30 min（5-30min，但孵育 30 min 转染效果更好），制备转染复合体。

5. 细胞转染。将转染复合体滴加入细胞培养液中，轻摇混匀，转入 CO2 培养箱中继续培养。

6. 换液。转染 6-12 h，更换成新鲜的细胞培养液。若无明显细胞毒性，也可不用换液。

7. 转染 24-48 h，利用 RT-PCR 检测目的基因 mRNA 表达水平，或利用 Western blot 检测目的蛋白表达水平。

五、注意事项。

1. 请利用对数生长期细胞进行转染，以提高转染效率。

2. 转染 siRNA 时，细胞密度以 30-50%为宜。

3. 增加 Omifection-R 用量可以提高转染效率，但也可能增加细胞毒性。

六、转染效果鉴定。