蛋白纯化层析空柱装柱保姆级图文详解

层析柱使用时间太长填料堵塞难清洗？

找不到合适体积的预装柱？

和我一起来做层析空柱的填装操作吧，让你快速得到一个崭新好用的层析柱！

第一步：选择层析空柱

Cytiva有三种层析空柱，可以根据以下层析空柱的特点来进行选择：

第二步：计算填料用量

根据公式计算填料的实际用量。压缩因子为填料在装填结束后被压缩的比例。计算公式为：

柱管内径和最高可容纳的柱床高度可从空柱说明书中查到，压缩因子可查阅填料说明书和装柱指南。

第三步：配制填料匀浆

（1）填料未拆分时，默认是以75%的填料浓度保存在20%乙醇中，实际装柱时也可以使用静置沉降法或者短暂离心查看悬液浓度；填料倒出前一定要摇匀，再倒入量筒中，经过一段时间的沉降，可以查看准确的填料体积。

（2）将填料置换到装柱缓冲液中。可使用抽滤换液或者短暂离心的方法进行置换。装柱缓冲液的成分可参考填料说明书或装柱指南，常见缓冲液是氯化钠溶液或氯化钠-乙醇-水溶液，低浓度的氯化钠可以防止填料在沉降过程中挂壁。

（3）添加装柱缓冲液配制填料悬液。装柱匀浆的浓度会根据柱管的内径和填料的粒径有所区别，大致为40-60%，具体浓度亦可参考填料说明书或装柱指南。

第四步：组装层析空柱

组装层析空柱，检查各部件是否拧紧。在柱子顶端连接好装柱器。在组装完成后可以将装柱器和空柱装满水后接入层析系统中，给予工作流速，检查层析空柱是否有漏液情况。

第五步：倒入填料匀浆

拧紧填料下端堵头，轻柔搅拌填料悬液，使用玻璃棒将填料匀浆缓慢一次性倒入空柱中。使用装柱缓冲液补足装柱器上端空余体积，盖上装柱器顶盖；设定报警压，将装柱器和空柱接入层析系统中。

第六步：装柱

在有流速的条件下填料沉降，柱床压实。压实一般分为两个阶段，第一阶段恒定流速，第二阶段恒定压力。恒定流速阶段，此时装柱器连接在柱子上，柱管下端与大气连接，随着填料沉降，可观察到压力逐渐升高。恒定压力阶段，拆去装柱器，将柱子下端接入层析系统中，设定压力后，可观察到随柱床压实，流速逐渐减慢至不再改变。装柱流速和压力参数参考填料说明书或者装柱指南。

第七步：安装柱头

待流速稳定，柱床不再继续下降后，用马克笔标注柱床位置，拆除装柱器，用装柱缓冲液补齐空柱上端体积，倾斜45度角安装柱头。对于XK柱和HiScale柱，将柱头调节杆旋转至标记线下1-2 mm的位置，拧紧其调节杆上端黑色部件，使密封圈充分膨胀。对于Tricorn柱，将填料上端滤膜放入柱管中，拧紧柱头至调节杆压实滤膜和柱床，压下柱头上方锁扣。

第八步：柱效测定

装填完成后，需要通过柱效测定评价层析柱的装填效果，柱效测定的方法有两种，一种是使用丙酮作为样品，水作为流动相，测定紫外吸收峰，另一种是用0.8 M NaCl作为样品，0.4 M NaCl作为流动相，测定电导峰值。

可手动运行柱效测定的流程，也可以通过方法编程进行自动运行。

在 Unicorn 软件中的「method editor」模块中，内置了「column performance test」柱效测定方法模板，方法包含「equilibration」和「column performance test」两个阶段，填入流速、上样体积等条件，在「System Control」模块中运行程序。

柱效测定结束后，在「Evaluation」模块中打开运行之后的结果，勾选「HETP」和「As」两个参数，即可在表格中看到结果。当HETP除以填料粒径≤ 3 ，0.8 < As < 1.8 时认为柱子装填的效果较好。

如果有任何填装参数找不到或者有层析空柱需要购买，请联系您身边的优宁维销售。

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