你的CDC实验，选对补体血清了吗？

一、补体complement：免疫防御中的重要组成部分

补体系统由30余种血浆蛋白和细胞表面蛋白组成，是固有免疫的重要组成部分。它在血清（serum）中以无活性的酶前体形式存在，通过经典途径、凝集素途径和旁路途径被激活，最终汇聚于C3裂解，形成膜攻击复合物（MAC）以裂解靶细胞，并产生C3a、C5a等炎症介质。其主要功能包括抵御病原体、清除免疫复合物，以及作为连接固有免疫与适应性免疫的桥梁。补体血清检测是评估机体免疫状态、诊断补体相关疾病及监测病情活动的核心工具。通过检测血清中补体成分的水平与功能，可以为自身免疫病、肾脏疾病、感染及遗传性补体缺陷的诊疗提供关键依据。在补体相关检测中，C3补体和C4补体的水平可为了解补体系统状态提供参考；结合补体活性检测（Complement Activity Test），有助于从补体成分水平和功能活性两个方面进行综合评价。

二、如何评价补体血清（complement serum）的活性？

补体活性受样本来源、处理、储存及冻融影响；不同批次/来源可能存在差异。补体活性检测常采用补体介导溶血实验，例如总补体溶血活性（CH50）实验（Complement-Mediated Hemolytic Assay）；旁路途径的功能活性则可通过AH50实验进行评价。CH50实验，采用抗体包被绵羊红细胞（致敏SRBC），加入待测血清后，激活经典途径导致SRBC细胞溶解，释放血红蛋白。能使50% 的致敏红细胞溶解的血清稀释度，其倒数即为CH50活性（U/mL）。CH50实验，可以展示样品血清的经典途径中，全体成分（C1-C9）活性是否正常。此外，也可以采用未致敏的兔红细胞，在特定缓冲液（阻断经典和凝集素途径）中，检测血清旁路途径被自发激活导致溶血（AH50）实验，检测产品的旁路途径活性。

 三、产品介绍

IPHASE产品线提供保留完整补体活性的人源（人血清补体池）与豚鼠、兔等动物源补体血清（含冻干型），以及去除IgG、去除IgG/IgM等免疫蛋白，并保持补体活性的血清（sera）。产品在生成过程中，注意控制环境温度及冻融次数。CH50活性高，并且没有明显波动。

四、补体血清的主要研究应用

补体血清的应用如下所示，其中补体活性与溶血实验、免疫学功能研究为核心场景。

1）补体依赖性细胞毒性（CDC）实验

补体介导细胞杀伤（Complement-dependent Cytotoxicity，CDC）实验：通过特异性抗体与靶细胞膜表面相应抗原结合，形成复合物。激活补体经典途径，所形成的攻膜复合物对靶细胞发挥裂解效应。本产品提供过程所需的补体经典途径功能，因此要求不同批次产品的补体活性稳定。

2）调理吞噬实验

调理吞噬实验，是一种功能性免疫学检测，是评价抗体和/或补体促进吞噬细胞清除靶标（如细菌）的能力。特异性抗体结合靶标后激活补体经典途径，使C3b、iC3b等补体片段共价沉积在靶标表面，这些片段被吞噬细胞表面的补体受体（如CR1、CR3）识别，并与抗体Fc段与Fc受体的结合协同，显著增强吞噬细胞对靶标的黏附、内化和胞内杀伤；补体激活产生的C5a等片段还可招募和激活吞噬细胞，进一步提高清除效率。因此，实验中可使用具有补体活性的血清（如幼兔血清或人血清），并根据实验设计设置补体灭活血清对照，以帮助判断观察到的吞噬或杀伤效应是否与补体活性有关。常见的热灭活条件为56 ℃、30分钟，具体条件及对照效果需在实验体系中验证。

3）免疫复合物清除机制研究

补体介导免疫复合物溶解与清除的机制研究。免疫复合物清除是机体防止循环免疫复合物在血管壁和组织沉积、进而引发炎症损伤的关键生理过程，其核心机制是“补体增溶—红细胞免疫黏附转运—肝脾巨噬细胞清除”：IC形成后激活补体经典途径，C3b共价沉积于IC并破坏抗原-抗体晶格，使IC保持可溶、抑制大分子不溶性沉淀形成；随后C3b/iC3b调理的IC通过免疫黏附结合到红细胞表面补体受体1（CR1）上，搭乘红细胞被转运至肝脏和脾脏，在那里红细胞CR1作为因子I辅因子将C3b降解为iC3b/C3dg，促使IC从红细胞释放并被肝库普弗细胞和脾巨噬细胞通过Fcγ受体和补体受体识别、内化和降解；此外，中性粒细胞和单核细胞也参与摄取清除。若补体成分、CR1或吞噬细胞功能缺陷，IC清除效率下降，易导致IC沉积并增加系统性红斑狼疮、肾小球肾炎等免疫复合物病的易感性。

质量控制与参考指标补体血清产品，参考指标，（以每批COA为准）

五、常见问题FAQ：

Q1：补体血清是什么？与普通血清有什么区别？

答： 补体血清（Complement Serum）是指含有具有生物活性的补体蛋白、可用于补体相关功能实验的血清（serum）。补体系统由多种血浆蛋白及调控因子组成，是先天免疫系统的重要组成部分，参与病原体清除、炎症反应及免疫调节等生理过程。补体血清与普通血清的主要区别在于产品的用途、补体活性要求及补体活性质量控制。普通血清（sera）主要用于细胞培养、蛋白研究及其他生物学实验，其补体活性通常不是核心质量指标；补体血清则更注重补体功能的完整性和活性，通常需要通过溶血实验或其他功能检测进行评价。需要注意的是，未经热灭活的普通血清也可能具有补体活性，但并不意味着其补体活性水平和活性的批次一致性能够满足补体功能研究的要求。

Q2：补体血清主要用于哪些实验？

答： 补体血清Complement Serum广泛应用于免疫学、微生物学、抗体药物研发及补体相关疾病研究，主要包括以下实验：

1） 补体依赖性细胞毒性实验（CDC）： 评价抗体通过激活补体系统介导靶细胞裂解的能力。

2） 补体溶血实验： 通过检测红细胞溶血程度，评价补体系统的功能活性。

3） 补体激活途径研究： 研究经典途径、凝集素途径和旁路途径的激活机制。

4） 抗体功能评价： 分析抗体与补体系统的相互作用，为治疗性抗体的功能研究提供支持。

5） 病原体清除及免疫研究：研究补体介导的调理吞噬、补体介导的杀菌作用及相关免疫防御机制，例如通过血清杀菌实验评价抗体和补体对特定细菌的杀伤能力。

6） 补体相关疾病研究： 用于研究补体异常激活、补体缺陷及相关疾病机制。

不同实验对补体血清的种属、活性水平及其他质量指标要求不同，应根据具体实验体系选择适用产品。

Q3：CH50 和 AH50 分别代表什么？如何选择补体血清？

答： CH50（50% Hemolytic Complement Activity）和 AH50（Alternative Pathway 50% Hemolytic Activity）是评价补体系统功能活性的常用指标。

选择补体血清时，建议重点关注以下因素：

实验目的：经典途径研究优先关注 CH50；旁路途径研究优先关注 AH50。

补体来源：根据靶细胞、抗体及实验模型选择适当种属的补体血清。

功能活性：优先选择具有明确活性检测结果及批次质控信息的产品。

产品形式：根据实验频率及保存条件选择冻干型（Lyophilized）或冷冻型（Frozen）补体血清。

CH50 和 AH50 不能直接互相替代，也不能仅凭其中一项指标判断补体系统所有激活途径的功能。

Q4：热灭活会对补体血清实验结果产生什么影响？

答： 对于需要保留补体活性的实验，不建议对补体血清进行热灭活处理。热灭活是通过加热降低血清中补体活性的一种常用处理方式。常见处理条件为 56 ℃、30 分钟，对于需要排除补体蛋白干扰的实验，可根据实验设计使用热灭活血清（Heat-Inactivated Serum）作为对照，但应验证热处理是否引入其他影响因素。

Q5：补体血清应该如何解冻、分装和保存？可以反复冻融吗？

答： 补体蛋白对温度变化及样品处理条件较为敏感，规范的解冻、分装和保存操作有助于维持其功能活性。冷冻型补体血清（Frozen）：按照产品说明书规定的温度长期保存，部分产品需要在 −70 ℃或更低温度下保存。使用前建议在受控条件下解冻，避免长时间暴露于室温。解冻后轻柔混匀，避免剧烈振荡及不必要的温度变化。根据单次实验用量进行分装，减少重复开盖和冻融操作。冻干型补体血清：按照产品说明书规定的温度和条件保存。使用前采用指定复溶液及规定体积进行复溶。复溶后轻柔混匀，避免产生大量泡沫。复溶后的保存期限及条件应遵循产品说明书。不建议反复冻融补体血清。 多次冻融可能造成补体活性下降，并增加实验结果的批内及批间变异。对于长期或连续性研究，建议采用单次使用量分装，并记录样品的冻融次数及保存时间。

Q6：如何判断补体血清的活性是否满足实验要求？

答： 判断补体血清是否满足实验要求，应结合产品质量控制数据及实际实验表现进行综合评价。常用评价方法包括：溶血活性检测： 通过 CH50、AH50 或特定溶血滴度检测，评价补体系统的功能活性。补体功能验证： 在 CDC 等实验中，通过阳性对照和阴性对照确认补体介导的生物学效应。批次质量控制： 查看产品批次检测报告（COA），重点关注补体活性、内毒素及其他与实验相关的质量指标。实验重复性评价： 比较同批次及不同批次样品在相同实验条件下的功能表现。需要特别说明的是，补体活性并非活性评价值越高就一定越适合实验。不同实验体系对补体浓度、反应时间及活性范围的要求可能不同。建议在正式实验前通过预实验确定适当的补体血清使用浓度，并建立可接受的实验质量控制标准