[TargetMol 明星分子]-Razuprotafib：精准调控Tie-2激活，守护血管屏障与功

■ 1. 背景介绍

▲ Razuprotafib (T16724)，CAS: 1008510-37-9的化学结构式

Razuprotafib (T16724)，CAS: 1008510-37-9 是一种高效的小分子蛋白酪氨酸磷酸酶β（HPTPβ，内皮领域常称VE‑PTP/PTPRB）抑制剂，IC50为50 nM。通过抑制该内皮磷酸酶，Razuprotafib 阻止受体酪氨酸激酶 Tie‑2 的去磷酸化，从而提高 Tie‑2 的磷酸化水平并增强其信号输出。Tie‑2 在内皮细胞中整合血管生成素信号，维持血管静息、屏障完整性及抗炎稳态；HPTPβ在生理上限制 Tie‑2 活性。Razuprotafib 的药理性抑制解除这一“刹车”，在基础血管生成素存在下实现 Tie‑2 的敏化性激活，并放大包括 PI3K–Akt 与 eNOS 磷酸化在内的下游级联反应，通常与细胞连接稳固和通透性降低相联系[1,2]。

在血管生成素–Tie 轴中，关键组分包括 Tie‑2 受体、其配体血管生成素‑1/‑2，以及位于黏附连接处、与 VE‑cadherin 并置的内皮磷酸酶 HPTPβ。这一空间关系使 HPTPβ 能将受体去磷酸化与连接动态相耦联。Razuprotafib 使系统偏向于处于磷酸化且具信号能力的 Tie‑2 状态，实验上与增强内皮屏障功能、加固细胞–细胞连接以及维持微血管稳态相一致[1,2]。由于其通过抑制负调控因子而非过表达受体或外加高剂量配体来实现激活，Razuprotafib 便于在接近生理配体背景下精细调节 Tie‑2 活性。

在生物学与研究应用方面，Razuprotafib 适用于解析 Tie‑2 如何在多种情境下主导血管稳定性。在体外，研究者可在原代内皮单层中瞬时提升 Tie‑2 磷酸化，用于评估跨内皮电阻、巨分子通量、骨架重塑与连接蛋白定位等指标；在离体或在体模型中，可用于时间分辨地考察微血管通透性、白细胞–内皮相互作用及灌注异质性在血管生成素–Tie–HPTPβ 结点被偏向激活时的变化[2]。值得注意的是，Razuprotafib 对 Tie‑2 激活有效，并在急性肾损伤研究中表现出保护作用，与通过维持内皮屏障与微循环灌注来减轻肾实质损害的机制相吻合[1]。

作为通路调节剂，Razuprotafib 作用于受体近端的磷酸酶层面，补充了配体干预策略，适合用于剖析 Tie‑2 与 VE‑cadherin 黏附连接的串扰，对比持续与瞬时 Tie‑2 磷酸化的后果，并区分内皮自律反应与旁分泌影响，从而服务于关于内皮静息、屏障控制及器官特异性血管应激（包括肾缺血再灌注与相关急性损伤范式）的机制研究[1,2]。

■ 2. 文献分享

■ 2.1 The stroke risk gene Foxf2 maintains brain endothelial cell function via Tie2 signaling.

▲ 多组学与体内外功能实验阐明 FOXF2 作为脑微血管内皮细胞（BEC）核心转录因子，通过 TIE2/VEGFR2-PI3K-Akt-eNOS 信号轴维持脑血管内皮稳态与血脑屏障完整性。 a–f 内皮特异性 Foxf2 敲除小鼠模型：单细胞测序提示迁移、增殖、血管生成、细胞黏附通路下调；WB 与脑组织免疫荧光证实 FOXF2 缺失造成 TIE2、NOS3、PECAM1 等屏障功能蛋白表达下降，脑部微血管结构破坏。 g–l FOXF2 敲除 iPSC 诱导内皮细胞：转录组富集血管发育相关基因，细胞增殖能力异常升高，TIE2/PECAM1 蛋白水平显著降低，体外验证 FOXF2 缺失损伤内皮正常功能。 m–p 过表达 FOXF2 细胞 ChIP-seq：鉴定 FOXF2 直接靶向 TIE2、VEGFR2 启动子区 Fox 家族结合基序；功能富集确定其调控血管生成、血脑屏障维持、内皮增殖等生物学过程。 q–r 基因组峰图与最终通路机制图：FOXF2 直接转录激活 TIE2 与 VEGFR2，下游激活 PI3K/Akt 通路促进 NOS3 生成 NO，最终保障脑内皮细胞正常生理功能与屏障结构稳定。

Razuprotafib (T16724) 被描述为通过抑制VE-PTP而激活Tie2信号。在缺失FOXF2的人源诱导内皮细胞中，Razuprotafib 恢复了磷酸化AKT的丰度，提示Tie2下游关键信号节点得到恢复。免疫细胞化学结果进一步显示，Razuprotafib 在FOXF2缺失细胞内挽救了磷酸化TIE2与磷酸化FOXO1的水平。在功能层面，Razuprotafib 使FOXF2敲除的内皮细胞一氧化氮水平升高。结合蛋白质组学与定量分析，研究显示FOXF2缺失细胞中与TIE2信号相关的蛋白丰度在Razuprotafib处理后得到挽救。综合上述证据，研究表明Razuprotafib 在缺失FOXF2的人类内皮细胞中挽救了TIE2信号及一氧化氮生成的不足。[3]

■ 2.2 Plasmodium falciparum impairs Ang-1 secretion by pericytes in a 3D brain microvessel model

▲ 体外芯片构建 HBVEC 人脑微血管内皮细胞与 HBVP 周细胞共组装三维血脑屏障（BBB）模型及屏障功能验证。 A 芯片装置构建示意图，上层接种内皮细胞、下层共培养周细胞模拟体内血管壁结构； B 网格支架上 HBVEC 与 HBVP 免疫荧光共染，形成连续管状血管网络； C 血管上下层周细胞覆盖率定量，与体内生理水平相近； D 血管顶面与底面 VE-cadherin、α-SMA 免疫荧光，证实内皮紧密连接完整、周细胞正常包被； E 紧密连接蛋白（β-catenin、ZO-1）、周细胞标志物（PDGFRβ）及细胞外基质 Collagen IV、Laminin 表达验证，屏障结构完整； F 跨屏障通透性检测，共培养 HBVP 周细胞可显著降低小分子物质渗漏，提升体外血脑屏障屏障密封性。

Razuprotafib (T16724) 被描述为能够下游诱导血管生成素–Tie 轴活性的化合物，并作为 Tie-2 激活剂用于评估其在人体脑微血管模型中的作用。在二维人脑微血管内皮细胞培养中，Razuprotafib 预处理 1 小时和 18 小时分别对寄生虫介导的内皮屏障破坏产生了 56% 与 43% 的部分保护。于三维人脑微血管模型中，短程 1 小时的 Razuprotafib 预处理显著恢复了血管完整性。在暴露于受感染红细胞逸出产物的情况下，Razuprotafib 预处理使通透性显著下降，并实现了对微血管渗漏的 35% 保护。研究还在三维微血管系统中验证了 Razuprotafib 的快速保护活性。此外，Razuprotafib 预处理对受感染红细胞逸出产物所致的屏障破坏表现出快速的部分保护。以上结果共同表明，Razuprotafib 通过激活血管生成素–Tie 通路中的 Tie-2，能够在二维内皮单层与三维人脑微血管模型中，对暴露于寄生虫来源因子的内皮屏障性质提供可量化且快速的保护与恢复效应。[4]

■ 2.3 Inhibition of VE-PTP rejuvenates Schlemm's canal in aged mice and acts via Tie2.

▲ 老年野生型小鼠局部滴眼给药 AKB-9778 降低眼压、保护房水流出道血管结构的体内药效验证。 A 动物实验时间轴：75–85 周龄开始每日两次滴眼液给药，79–89 周检测眼压并取材分析； B–C PECAM-1 血管内皮免疫荧光显示，AKB 给药组房水引流通道（SC）血管面积显著高于溶剂对照组，改善衰老造成的血管退行性损伤； D 眼压监测结果：AKB-9778 可显著降低老年小鼠眼内压（IOP），明确该滴眼小分子药物具备降眼压与小梁网血管保护双重作用。ns 无统计学差异，*、** 代表统计学显著差异。

Razuprotafib (T16724) 被报道可抑制VE-PTP，并通过VE-PTP/Tie2通路提升Schlemm管功能；其滴眼途径在老龄阶段可改善Schlemm管功能并降低眼内压。在老年小鼠中，Razuprotafib滴眼增加了Schlemm管面积并降低了眼内压。定量上，相较载体对照，Schlemm管面积显著增加7.6%（±2.1%），且处理眼的眼内压显著下降。同时，观察到Schlemm管内皮中Prox-1阳性细胞数量增加，提示组织活化复苏，并且处理组的凋亡细胞显著减少。在VE-cadherin-Y685F与野生型小鼠中，Razuprotafib分别使Schlemm管面积增加13%（±3.3%）与11.8%（±3.4%）。机制方面，Tie2被辨识为介导Razuprotafib扩增Schlemm管面积效应所必需的VE-PTP底物；该抑制剂在Schlemm管内皮中以VE-PTP为靶点，其相互作用导致Schlemm管扩大并降低老年小鼠眼内压。与此一致，诱导性在Schlemm管内皮中失活VE-PTP基因产生了与Razuprotafib相似的效应，支持Razuprotafib在Schlemm管中经由VE-PTP/Tie2发挥作用的结论。[5]

■ 2.4 Razuprotafib Does Not Improve Microcirculatory Perfusion Disturbances nor Renal Edema in Rats on Extracorporeal Circulation.

▲ 循环骤停（ECC）休克模型下，对照组、ECC 模型组、ECC+Razu 给药组循环血流动力学与动脉血气多指标时序变化。 A–B 循环指标：ECC 诱导平均动脉压、心率剧烈波动，Razu 可部分稳定血压与心率水平； C 红细胞压积：ECC 造成血液浓缩，给药后得到明显改善； D–I 血气与代谢指标：ECC 引发酸中毒（pH 下降、BE 负值增大）、PaCO₂升高、PaO₂降低、碳酸氢根耗竭、乳酸大量堆积；Razu 干预可有效纠正酸碱失衡、提升血氧、降低乳酸堆积，改善休克导致的内环境紊乱。、**、***、#、## 代表统计学差异。

■ 2.5 Lipid Nanoparticle Delivery System for Normalization of Tumor Microenvironment and Tumor Vascular Structure.

■ 3. 结语

Razuprotafib是一种高效的小分子抑制剂，针对内皮磷酸酶VE-PTP/HPTPβ，该磷酸酶生理上通过去磷酸化抑制受体酪氨酸激酶Tie-2。Razuprotafib通过抑制VE-PTP，防止Tie-2去磷酸化，提升Tie-2的磷酸化水平，激活下游PI3K–Akt和eNOS信号通路，促进内皮细胞连接稳固并降低血管通透性。文献显示，Razuprotafib能够挽救FOXF2缺失内皮细胞中Tie-2信号缺陷，保护脑微血管模型中受到寄生虫破坏的内皮屏障，促进老龄小鼠Schlemm管功能恢复并降低眼内压，同时在急性炎症模型中改善肺部间质炎症和呼吸功能。此外，以pH敏感脂质体递送实现了药物的控释和持续的内皮稳定。未来研究可进一步探索Razuprotafib在血管相关疾病、器官特异性损伤模型（如急性肾损伤）中的治疗潜力，以及优化递送系统以提升治疗效果和靶向性。