CPS细胞系源自鳜（Siniperca chuatsi）胃组织，已保藏于中国典型培养物保藏中心，保藏号为CCTCC NO:C2023242。该细胞可稳定传代50代以上，核型为48条，并表达胃组织特异性标志基因。CPS对弹状病毒IHSV敏感，适用于鳜鱼病毒学、消化道相关研究及病原—宿主互作研究。作为鱼类细胞系，CPS在培养温度、渗透压及CO2依赖等方面与哺乳动物细胞存在明显差异，培养过程中需重点控制培养温度和血清比例。
一、细胞复苏
1.【准备工作】 配制完全培养基：DMEM高糖（abs9483-500ml/SV30303.01）+10%FBS（abs972-500mL/SV30302.03）+1%P/S（abs9244-100ml/SV30010），取9mL完全培养基于26-28℃预热。水浴锅预热至37℃，生物安全柜紫外照射30min。
2.【融化】从液氮/冰箱取出冻存管，37℃水浴快速摇晃融化，约1-2min。
3.【重悬】75%酒精擦拭冻存管外壁，安全柜内开盖，将细胞悬液沿管壁缓慢滴入含9mL预热完全培养基的离心管中，轻柔混匀。
4.【离心】300×g离心5min，弃上清，去除DMSO残留。
5.【重悬】加入1-2mL完全培养基轻轻吹打重悬；接种T25培养瓶（加入5-6mL完全培养基），十字混匀，标注名称、代次、日期。
6.【培养】放入28℃、5%CO2培养箱静置培养；次日换液，去除死细胞碎片。
二、细胞传代
1.【实验准备】 配制完全培养基：DMEM高糖（abs9483-500ml/SV30303.01）+10%FBS（abs972-500mL/SV30302.03）+1%P/S（abs9244-100ml/SV30010）。提前取出PBS（abs962-500ml/SV30305.01）、完全培养基、0.25%胰酶-EDTA（abs47047375-100mL/SH30042.01），恢复至室温；生物安全柜提前使用紫外照射30min。
注意：CPS推荐培养条件为DMEM+10% FBS、28℃、5%CO2；该细胞系建立过程中仅胃组织成功建系，对培养条件变化较敏感，建议固定培养体系。
2.【镜检】融合度达80%-90%时传代，细胞铺展饱满、形态均一即可操作。
3.【细胞清洗】吸弃旧培养基，沿瓶壁缓慢加入2-3mL PBS（abs962-500ml/SV30305.01），轻摇覆盖，吸弃。
4.【细胞消化】加入0.25%胰酶-EDTA（abs47047375-100mL/SH30042.01）覆盖瓶底，28℃消化1-3min，镜下见细胞回缩变圆即加完全培养基终止。
注意：消化后轻柔吹打使细胞充分分散，避免成团影响后续贴壁与病毒实验均一性。
5.【离心】300×g离心5min，弃上清；加入完全培养基轻轻吹打重悬。
6.【传代】按1:2接种至新瓶（建系沿用1:2传代），补加完全培养基至工作体积，十字混匀，标注信息。
7.【镜检】镜下确认分散均匀，放入28℃、5%CO2培养箱，24-48h观察细胞状态。
注意：鳜鱼细胞增殖较哺乳动物慢，28℃下传代周期偏长（约3-5天），换液频率约2-3次/周；高代次（＞50代）后建议重新复苏低代次种子。
三、细胞冻存
1.【准备工作】冻存液：无血清细胞冻存液（abs9417-100mL）或基础培养基+20%FBS（abs972-500mL/SV30302.03）+10% DMSO（abs9187-100mL）；冻存管标注名称、代次、冻存人、日期；安全柜紫外照射30min。
2.【细胞收集】融合度80%-90%时按传代步骤消化收集，300×g离心后弃上清。
3.【细胞重悬】加入冻存液（约1mL/管）轻柔吹打重悬，细胞密度约1-5×10⁶/mL。
4.【冻存】每管1mL入冻存盒，-80℃过夜后转移至液氮罐长期保存；鱼类细胞复苏存活率约70%，建议一次冻存多管备用。
四、关键注意事项
1.温度与培养条件
（1）28℃、5%CO2为推荐条件，严禁置于37℃培养；
（2）用DMEM培养需CO2环境以维持pH；
（3）温度波动会影响增殖速度与病毒敏感性，实验前应稳定培养至少2代。
2.培养基与血清选择
（1）标准方案：DMEM高糖 + 10%FBS + 1%P/S，保持条件一致；
（2）血清质量直接影响细胞状态与病毒扩增滴度，建议使用优级胎牛血清（abs972-500mL/SV30302.03）并固定批号。
3.病毒实验要点
（1）CPS对弹状病毒（IHSV）敏感，感染12h即出现细胞病变、48h大量死亡，可用于病毒分离与滴度测定；
（2）感染实验应使用状态一致的低代次细胞，接种密度均一以保证结果可重复；
（3）病毒操作需在相应生物安全等级下进行，避免交叉污染。
4.形态与污染判断
（1）正常：上皮样/成纤维样贴壁生长，单层铺展、形态均一；
（2）异常：细胞圆缩脱落、大量漂浮、颗粒增多、培养基浑浊（污染）。
5.支原体与鉴定
（1）鱼类组织（鲤科、鲑科等）易携带支原体，建议每2-3月以PCR或荧光染色法检测；
（2）以16S/细胞色素B序列或核型分析确认细胞身份与种属纯度。
五、胎牛血清
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