人血小板裂解液用于T细胞生产：hPL与FBS、人AB血清实测对比

人血小板裂解液用于T细胞生产的特点与价值—整合三篇同行评审文献的实测数据

摘要：基于三项独立研究，对比hPL与胎牛血清、人AB血清在T细胞培养中的表现。hPL无需改动工艺参数，可提升记忆型T细胞比例，降低细胞衰老水平，改善体内抗肿瘤效果。

关键词：人血小板裂解液、hPL、T细胞扩增、T细胞培养、CAR-T、细胞治疗、记忆型T细胞、胎牛血清替代、慢病毒转导、T细胞表型、培养基补充物

概览

做了什么：三篇独立研究采用同一方法——不改造基因、不增加分选或工艺步骤，仅把T细胞培养基里的血清补充物从胎牛血清（FBS）或人AB血清（ABS）换成人血小板裂解液（hPL）（点击查看），比较产出细胞的质量与体内干预效应差异。

看到了什么：常规体外检测几乎看不出差别，甚至短期杀伤指标更低；但拉长观察窗口或进入动物体内后，产出细胞的分化状态、衰老凋亡水平与抗肿瘤效果出现系统性差距。

价值在哪：原料端一致可控、工艺端无需改动、产品端质量更好——三层价值都落在可核查的数据上，而不是概念描述。

人血小板裂解液（hPL）更换：三层价值速览

三篇文献中同一个更换动作，用人血小板裂解液（hPL）替换胎牛血清（FBS）或人AB血清（ABS），在原料、工艺、产品三个层面分别兑现为不同的价值。

表1.人血小板裂解液（hPL）更换价值速览

1. 原料—把"生物来源"变成"可控参数"

人源材料的天然短板是批次差异。这一层的价值不在于成分"更好"，而在于每一项变异都有对应的控制动作。

价值点一：池化规模明确，批间变异的减震器

本研究中每批hPL（Sexton Biotechnologies）使用约100个供体血小板单位解冻后混合。供体数量越大，单个供体生物学波动对成品的影响被稀释得越充分。

价值点二：病原风险有工艺动作，不只依赖筛查

从原料到放行的每个风险点都有对应处置：原料采购自FDA注册且AABB认证的血库；供者经严格筛查检测；血小板采集于含ACD-A抗凝剂的血袋、在失效后48小时内完成冻存；池化后采用电子束（E-beam）辐照做病原减少处理。选择辐照的理由是双向的——既降低输血传播感染风险，又维持其作为细胞培养补充物的性能。

常规筛查无法覆盖所有病原（非地方性病原体或新病毒株可能缺乏诊断方法、也不在常规检测范围内），因此病原减少处理与供者筛查是互补关系，而非替代关系。这也解释了为什么临床级工艺越来越倾向选择病原减少型材料——它直接回应了监管对风险缓解的关切。

价值点三：因子谱可测、批次可监测

研究用抗体芯片对640种人细胞因子做了定量（ABS与hPL各3批），结果如下：

表2. ABS与hPL人细胞因子定量差异

对69种差异蛋白做基因本体分析，共有21个功能通路呈现出统计学可信的蛋白富集，其中"免疫应答"相关条目涉及的蛋白数量更多（22种），且大部分在hPL中浓度更高——而不是单纯地"什么因子都更多"。

可监测性是这一层的实际落脚点：每批都测渗透压与总蛋白，另有10批样本额外做了蛋白定量与关键因子（CXCL12、TGFB1、IGF1）ELISA监测，用于确认批间波动范围。对使用者来说，这意味着"批次差异"是一个有数据、可追溯、可设限的参数，而不是需要被动接受的黑箱。

图1. ABS与HPL的蛋白质组学分析。(a)火山图展示ABS和HPL各3批次定量蛋白基于P值和倍数变化的分布情况 (b)对69个FC≥10且P≤0.01的蛋白进行基因本体（Gene Ontology）分析。(c)基于GO分析绘制参与免疫应答生物学过程的22种蛋白浓度图。(d)采用ELISA检测ABS和HPL中的IL7浓度[2]。

2. 工艺—换了补充物，不需要改任何参数

切换补充物较大的顾虑是转导效率和扩增产量。这一层的价值很直接：两项都没有被牺牲，其中一项指标反而更优。

价值点四：转导步骤完全兼容，表达强度反而更高

研究用慢病毒递送GFP报告基因，在低感染复数（MOI<1）下比较三种启动子（CMV、PGK、EF1A，其中EF1A在临床CAR载体中常用）。第7天转导效率范围：FBS 15%–37%、ABS 10%–26%、hPL 14%–30%——三者无明显差异。

但在转基因表达强度（GFP+细胞平均荧光强度）上出现差异：以FBS为基准，hPL组为2.0±0.3倍，ABS组为0.7±0.2倍（P=0.0008）。该现象在三种启动子、多批供体细胞、多个批次中均可重复，说明不是某一启动子的特有效应。

图2. 添加不同培养基补充物对原代T细胞慢病毒转染的影响。(a、c、e)为转染7天后，采用胎牛血清、自体血清或人血小板裂解液体系，通过慢病毒递送CMV-GFP(a、b)、PGK-GFP(c、d)或EF1A-GFP(e、f)时的绿色荧光蛋白阳性细胞百分比；(b、d、f)为平均荧光强度[2]。

价值点五：产量接近，纯度与杂质指标方向更优

扩增条件统一：冻存PBMC经CD3/CD28激活，在IL-2（100 IU/mL）存在下培养14天，补充物浓度5%（v/v），每种补充物测试3个批次、3名供体。

表3.三种不同补充物培养冻存PBMC的扩增数据

三点判读：产量上hPL的43.3±9.4倍与ABS的40±3倍接近；纯度指标上T细胞纯度97.3%为三组峰值、NK残留1.3%为三组低值（差异未达统计学标准，但趋势一致）；转导这一关键工艺步骤无需为换补充物调整参数。对免疫细胞产品而言，NK残留低意味着终产品组成更接近目标细胞群，对放行与表征是加分项。

价值点六：与"去IL-2"的临床工艺方向协同

研究测试了改变细胞因子条件时补充物的表现。IL-2促终末分化，而IL-7/IL-15更利于维持低分化表型，是近年临床工艺的探索方向。在这两种方案下，hPL组均明显优于ABS组：

IL-15单独（5ng/mL）hPL 227.3±38.9倍｜ABS 72.2±4.4倍（P=0.016）

IL-7+IL-15（各5ng/mL）hPL 290.3±22.6倍｜ABS 157.2±20.2倍（P=0.011）

这说明补充物与细胞因子方案之间存在交互作用——越是脱离IL-2的体系，补充物本身的质量对结果影响越大。选型时若已在推进去IL-2工艺，这一项比标准IL-2条件下的数据更有参考价值。

价值点七：可用浓度更低，成本比较口径应重新算

另一篇研究给出了浓度下限的直接对比：hPL可降至2.5%仍支持T细胞生长与表型维持，而FBS低于5%即阻碍扩增。这意味着评估成本时不应只看每毫升单价——按"支撑同等扩增所需的有效补充物量"折算，比较口径会发生变化。对于培养基成本占比较高的规模化生产，这一项值得单独测算。

3. 产品—质量差异最终在体内兑现

这是三层价值中较实质的一层。三篇文献都观察到同一个规律：差异在体外短期指标上不明显，在产品质量与体内体内干预效应上却很清楚。

价值点八：更高的记忆型比例，更低的衰老与凋亡

回输产品中naïve样与中央记忆型T细胞的比例，与体内持久性和抗肿瘤效果相关。第14天表型检测：CD4+中央记忆型比例hPL组42.3%，ABS组10.5%——四倍差距。

在第三篇研究中，机制层面得到进一步验证。研究者对培养细胞做RNA测序，检出4561个差异表达基因，FBS组富集凋亡与衰老相关基因签名。三项独立验证与该签名一致：衰老标记CD57/KLRG1双阴性细胞比例更高、撤除IL-2后9天存活更好、端粒酶活性（TRAP法）更强。阳性结果集中出现，方向一致。

价值点九：体内治疗结果出现分水岭

这是三篇文献中较有说服力的一组数据，从体外长期共培养到体内动物模型，均显示出hPL组与对照组的体内干预效应差异。

体外长期共培养：长效肿瘤控制差异明显

在9天体外长期共培养体系中，hPL组的肿瘤细胞扩增倍数仅为0.06±0.03倍，而FBS对照组为15.5±10.0 倍；同时hPL组T细胞的增殖能力更强。拉长观察窗口后，hPL培养的CAR-T细胞凭借持续的增殖与杀伤能力，展现出更优的长期肿瘤控制效果[2]。

小鼠体内肿瘤模型：无瘤率与生存期优势明确

在NSG小鼠皮下Capan-1胰腺癌模型中，回输P28z CAR-T细胞后，hPL组的肿瘤控制效果明显优于FBS与ABS组。实验终点时，hPL组无瘤小鼠比例为9/12，FBS组仅为1/12，ABS组为2/12；同时hPL组小鼠总生存期更长，且在肿瘤再挑战模型中仍能保持抗肿瘤能力。

图3. 不同补充物培养的CAR-T细胞体内抗肿瘤效果对比a 实验设计示意图；b 不同时间点肿瘤生物发光成像与定量；c 肿瘤体积统计；d 各组单个小鼠肿瘤生长曲线；e 生存曲线[2]

γδT 细胞模型的独立验证

第三篇研究在CAR-Vδ2 T细胞的NALM6血液瘤异种移植模型中（共147只小鼠）独立复现了该结论：FBS组培养的CAR-T细胞体内抗肿瘤作用较弱，仅在治疗后第3、7天短暂起效；hPL组的抗肿瘤活性更强，其中搭配4-1BB共刺激结构域的CAR分子效果较优。

两个值得记住的对照结果

其一，不是"人源就行"。研究设了人AB血清组做头对头：ABS组CAR表面表达反而较高，但体内活性仍弱于hPL组。说明优势来自hPL的具体成分构成，而不是"人源"这一属性本身。

其二，不能只挑体内数据说事。三篇研究都记录了hPL组在常规体外指标上没有优势——文献[2]观察到短期杀伤略低，文献[3]则发现脱颗粒与细胞因子分泌两组相当。这个"反直觉"恰恰是选型时需要提前知道的一点：用常规短期放行指标评价培养基优劣，可能得出相反结论。此外，目前尚无研究通过补充单一细胞因子复现hPL的完整效应（文献[3]中研究者按hPL特征提出TGF-β为候选因子，但作者明确说明其单独无法解释所观察到的差异，起效成分仍有待鉴定）。

总结

三层价值的共同点：每一项都能落到一个可核查的数值上。

• 原料层——约100供体池化、逐批检测、电子束辐照、无肝素，把生物材料的批次差异变成可测、可限、可追溯的参数；

• 工艺层——转导与扩增无需改参数，纯度与杂质指标方向更优，可用浓度降至2.5%，且与去IL-2的工艺方向协同；

• 产品层——记忆型比例四倍差距、衰老凋亡签名系统性降低，最终在动物模型中兑现为9/12对1/12的无瘤率差距。

对细胞治疗企业而言，培养基补充物是一个"投入可控、影响直接"的变量——它不动基因、不加步骤，但决定了产出细胞在体内的表现下限。

参考文献

[1] Canestrari E, Steidinger HR, McSwain B, Charlebois SJ, Dann CT. Human Platelet Lysate Media Supplement Supports Lentiviral Transduction and Expansion of Human T Lymphocytes While Maintaining Memory Phenotype. Journal of Immunology Research. 2019;2019:3616120.

[2] Torres Chavez A, McKenna MK, Canestrari E, Dann CT, Ramos CA, Lulla P, Leen AM, Vera JF, Watanabe N. Expanding CAR T cells in human platelet lysate renders T cells with in vivo longevity. Journal for ImmunoTherapy of Cancer. 2019;7(1):330.

[3] Mo F, Tsai CT, Zheng R, Cheng C, Heslop HE, Brenner MK, Mamonkin M, Watanabe N. Human platelet lysate enhances in vivo activity of CAR-Vδ2 T cells by reducing cellular senescence and apoptosis. Cytotherapy. 2024;26(8):858-868.

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说明：本文为文献数据整合整理，所有数据、结论与局限均引自上述已发表文献。本文不构成功效承诺或适应症主张，具体工艺适配与法规要求请以贵司验证数据及当地监管规定为准。

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