Human HSPA1A ELISA Kit如何选型？

1. 人HSPA1A（Hsp70）的生物学角色是什么？

基因HSPA1A无内含子，编码70kDa热休克蛋白1A，属Hsp70蛋白家族。该蛋白与其他热休克蛋白结合后可稳定现有蛋白防止聚集，并介导新翻译蛋白在胞质溶胶和细胞器中折叠；还通过与富含AU元素RNA结合蛋白1相互作用参与泛素蛋白酶体途径。该基因位于主要组织相容性复合体III类区域。货号abs5511363的Human HSPA1A ELISA Kit反应种属为Human，用途为细胞裂解液和组织匀浆。

2. Human HSPA1A ELISA Kit的双抗体夹心法原理是什么？

本试剂盒采用双抗体夹心法酶联免疫吸附试验。往预先包被人HSPA1A捕获抗体的微孔中依次加入样本、标准品、生物素标记的检测抗体与HRP酶结合物，经温育和洗涤后用TMB显色。TMB在过氧化物酶催化下转蓝、加酸后转黄，颜色深浅与样本中人HSPA1A呈正相关，450nm测吸光度计算浓度。96T配置含预包被酶标板8孔×12条、标准品2支、通用稀释液2×20mL、100倍浓缩生物素化检抗与酶结合物各120uL、20×洗涤液2×10mL。

3. 组织匀浆与细胞裂解液样本怎么处理？

细胞裂解液：贴壁细胞用预冷PBS清洗、胰酶消化后1000×g离心5分钟收集，悬浮细胞直接离心；细胞用预冷PBS清洗3次，每1×10^6个细胞加150-200uL PBS重悬（推荐加蛋白酶抑制剂），反复冻融或超声破碎，提取液2-8℃、1500×g离心10分钟取上清。组织匀浆：预冷PBS（0.01M，pH7.4）冲洗后称重剪碎，按1:9重量体积比加PBS冰上研磨，可超声或反复冻融，5000×g离心5-10分钟取上清。

4. 检测范围1.56-100ng/mL与回收率如何解读？

该试剂盒检测范围1.56-100ng/mL，灵敏度0.75ng/mL，标准品梯度为100、50、25、12.5、6.25、3.12、1.56ng/mL；计算时以浓度为横坐标、OD值为纵坐标，在双对数坐标纸上绘出四参数逻辑函数标准曲线。性能上板内与板间变异系数均小于10%；加标回收率组织匀浆（n=8）为84-104%、平均101%，细胞裂解液（n=8）为94-106%、平均99%。1:2稀释时组织匀浆平均回收率92%、细胞裂解液94%，1:4时分别为95%与99%。

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