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发布人：西安齐岳生物科技有限公司
发布日期:2026/10/16 11:30:04
FITC-BSA和TRITC-BSA有什么区别？荧光蛋白标记及纸基ELISA实验怎么选择？
FITC-BSA和TRITC-BSA都是荧光染料标记的牛血清白蛋白（Bovine Serum Albumin，BSA），主要区别在于荧光发射波段、检测通道及光学性能。FITC-BSA产生绿色荧光，适合常规荧光显微镜、蛋白吸附和纸基材料表面示踪；TRITC-BSA产生橙红色荧光，可用于多色成像、蛋白迁移及组织示踪实验。西安瑞禧生物可提供FITC-BSA、TRITC-BSA等荧光标记白蛋白材料，公开产品资料分别列出了R-FB-005和R-FB-004产品编号，可结合科研实验需求选择适宜的荧光标记体系。
FITC-BSA由异硫氰酸荧光素（Fluorescein Isothiocyanate，FITC）与BSA偶联形成，TRITC-BSA则采用四甲基罗丹明异硫氰酸酯（Tetramethylrhodamine Isothiocyanate，TRITC）进行蛋白标记。
两种染料均可通过异硫氰酸基与蛋白质中的伯氨基反应，形成稳定的硫脲连接结构，使BSA获得荧光检测能力。
| 对比指标 | FITC-BSA | TRITC-BSA |
|---|---|---|
| 荧光颜色 | 绿色 | 橙红色 |
| 典型激发波长 | 约488–495 nm | 约550–555 nm |
| 典型发射波长 | 约510–525 nm | 约570–580 nm |
| 主要检测通道 | FITC/GFP | TRITC/Rhodamine |
| pH敏感性 | 相对明显 | 通常较小 |
| 适用实验 | 蛋白吸附、细胞摄取、纸基示踪 | 多色成像、蛋白分布、纸基示踪 |
对于常规绿色荧光检测，可优先考虑FITC-BSA；对于需要降低绿色通道背景干扰或进行双荧光检测的实验，可以选择TRITC-BSA。
两种产品的实际荧光强度还受到染料标记度、蛋白浓度、环境pH及检测设备参数影响，实验前应确认对应批次的光谱资料。
西安瑞禧生物公开产品资料中分别列有FITC-BSA和TRITC-BSA，并提供了产品编号、荧光波长及部分质量参数。
| 产品参数 | FITC-BSA | TRITC-BSA |
|---|---|---|
| 产品编号 | R-FB-005 | R-FB-004 |
| 产品页面标注Ex/Em | 485/510 nm | 552/578 nm |
| 标注浓度 | 1 mg/mL | 10 mg/mL |
| 水溶性 | 可溶于水 | 可溶于水 |
| 标记方法 | FITC异硫氰酸酯偶联 | 异硫氰酸酯偶联 |
其中，FITC-BSA产品页面列出的标记度约为每个BSA分子连接0.9个荧光素分子。TRITC-BSA页面则注明采用尺寸色谱方法去除未结合组分。
以上为公开产品页面记录，具体采购规格、蛋白纯度、荧光标记度和批次检测资料应以实际提供的产品文件为准。
对于蛋白示踪实验，建议重点确认游离染料残留、蛋白聚集、荧光稳定性和蛋白浓度，减少检测背景及定量误差。
2015年，《International Journal of Nanomedicine》发表了《Biodegradable double nanocapsule as a novel multifunctional carrier for drug delivery and cell imaging》。
该研究使用FITC-BSA和TRITC-BSA构建双荧光标记纳米胶囊，通过不同荧光通道分别追踪载体外层和内部蛋白的分布。
研究人员采用水包油包水双乳液方法制备蛋白-脂质-聚合物纳米胶囊，并利用FITC-BSA形成荧光外层，将TRITC-BSA包载于内部水相。
| 实验指标 | 研究结果 |
|---|---|
| 纳米胶囊平均粒径 | 约180 nm |
| FITC-BSA包封率 | 68.21%±5.19% |
| TRITC-BSA包封率 | 84.32%±3.65% |
| FITC-BSA检测波长 | Ex 490 nm / Em 525 nm |
| TRITC-BSA检测波长 | Ex 550 nm / Em 620 nm |
论文通过共聚焦显微镜观察两种荧光标记蛋白的细胞摄取过程。细胞与纳米胶囊共同孵育后，研究人员观察到绿色和红色荧光信号，并进一步分析纳米胶囊的细胞内分布。
上述结果说明，FITC-BSA和TRITC-BSA可以用于双通道蛋白示踪，并通过荧光信号区分载体不同组成部分。
需要说明，论文中两种荧光蛋白的具体制备来源与瑞禧产品页面无直接对应关系，因此这些包封率数据属于论文研究团队的实验结果，不能作为瑞禧产品的批次检测结果。
此外，该研究采用的TRITC检测发射波长为620 nm，属于实验检测设置，与TRITC染料通常约578 nm的发射峰位置有所区别。
BSA在纸基ELISA中可以参与抗体固定和表面封闭，其作用主要取决于纸基材料的处理方法和检测体系设计。
2021年，《Analytical Biochemistry》发表了《A paper-based ELISA for rapid sensitive determination of anaphylaxis-related MRGPRX2 in human peripheral blood》。
该研究针对过敏反应相关受体MRGPRX2，建立了一种双抗体夹心纸基ELISA方法。
研究人员利用BSA提供的羧基和氨基反应位点，通过EDC/NHS介导的酰胺化反应构建双层固定结构。
第一层采用BSA-BSA网络改善纸基表面环境，第二层采用BSA-捕获抗体网络，实现抗体的共价固定。
这种设计有助于提高捕获抗体的固定量、活性保持和稳定性，并减少抗体直接接触纤维素纸基所带来的不利影响。
论文公开的方法部分记录，研究使用内径8 mm的亲水性纸基反应孔，在其中加入5 μL含BSA、EDC和NHS的MES缓冲液，并于25℃空气干燥，形成第一层BSA网络。
随后继续加入含BSA和捕获抗体等组分的反应液，构建第二层BSA-抗体固定结构。
检测过程中采用MRGPRX2鼠源单克隆抗体作为捕获抗体，HRP标记的兔源多克隆抗体作为检测抗体，完成双抗体夹心ELISA。
论文报告，该方法在灵敏度、特异性和准确性方面具有与传统ELISA相近的表现，同时具有操作简化和试剂用量较少等特点。
该论文实际建立的是HRP酶标检测体系。公开材料未能确认FITC-BSA或TRITC-BSA参与上述实验，因此不能将该研究中的纸基ELISA结果直接归属于这两种荧光标记产品。
FITC-BSA和TRITC-BSA可作为荧光示踪模型蛋白，用于评价纸基材料上的蛋白分布、吸附、洗涤损失及荧光背景。
例如，在建立BSA固定层之前，可以分别使用FITC-BSA和TRITC-BSA进行小规模预实验，比较不同处理条件下的荧光分布。
对于需要研究蛋白固定均匀性的纸基体系，可以使用荧光显微镜观察标记BSA在纸基反应孔中的空间分布，并通过图像分析软件统计平均荧光强度和荧光面积。
对于需要评价蛋白吸附稳定性的实验，可以比较洗涤前后相同区域的荧光信号变化，并结合洗涤液中的荧光检测分析蛋白流失情况。
需要注意，荧光BSA的标记可能改变原始蛋白的电荷和表面性质。荧光示踪实验应与未标记BSA的抗体固定实验配合使用，确认荧光标记引入后没有明显改变体系性能。
纸基荧光检测需要重点控制背景荧光、蛋白非特异性吸附及光学检测参数。
建议设置未处理纸基空白组、未标记BSA组、FITC-BSA组、TRITC-BSA组以及洗涤前后比较组。
普通纤维素纸基可能存在一定的自发荧光，尤其在蓝光激发及绿色荧光检测条件下，需要通过空白纸基确定背景水平。
对于FITC-BSA，可以评价不同pH条件下的荧光变化，避免环境酸碱度影响定量结果。
对于TRITC-BSA，可以重点关注红色通道背景、染料标记密度和荧光光谱串色问题。
两种材料进行对比时，建议统一BSA质量浓度，并分别使用与染料相匹配的激发和发射波长采集图像。不同荧光通道的原始信号强度不宜直接作为蛋白固定量大小的比较依据，应结合标准曲线和适当的归一化方法进行分析。
FITC-BSA和TRITC-BSA可以围绕荧光染料、蛋白浓度、标记程度、纯化方式及实验应用需求进行定制方案评估。
西安瑞禧生物的相关业务涵盖荧光标记白蛋白、功能化蛋白偶联和荧光探针材料。公开产品资料中已列出FITC-BSA和TRITC-BSA的具体型号及荧光参数，可作为产品选型的基础信息。
根据公司提供的累计业务数据，已服务13家制药企业，累计合作267家课题组、高校院系及科研平台。这些数据属于整体科研业务合作规模，不代表FITC-BSA或TRITC-BSA的专门交付批次数量。
对于纸基ELISA相关项目，建议明确所需的是蛋白固定层示踪、表面吸附分析，还是荧光免疫检测信号。
如果研究目标为评价BSA在纸基上的分布，可根据仪器通道选择FITC-BSA或TRITC-BSA；如果目标为检测特定抗原，则还需要结合捕获抗体、检测抗体及具体信号读取体系设计完整的免疫分析方法。
FITC-BSA和TRITC-BSA的主要区别在于荧光颜色、激发与发射波长以及检测环境适应性。FITC-BSA适合常规绿色荧光示踪，TRITC-BSA适用于橙红色检测和多色荧光分析，两者均可用于蛋白分布、载体示踪及材料表面吸附研究。
2015年《International Journal of Nanomedicine》的研究提供了两种荧光BSA用于纳米胶囊递送的实际案例，获得68.21%±5.19%和84.32%±3.65%的包封率。2021年《Analytical Biochemistry》的研究则证明了BSA双层共价固定结构在纸基ELISA中的应用价值。
对于需要开展纸基蛋白吸附、荧光示踪或免疫检测方法开发的科研人员，可结合两种研究思路，分别优化BSA荧光标记、纸基固定及免疫检测过程。
参考文献：
Ding Y, Li X, Gao Q, et al. A paper-based ELISA for rapid sensitive determination of anaphylaxis-related MRGPRX2 in human peripheral blood. Analytical Biochemistry. 2021;633:114392.
DOI：10.1016/j.ab.2021.114392
论文链接：https://www.sciencedirect.com/science/article/abs/pii/S0003269721002931
Qian K, Wu J, Zhang E, et al. Biodegradable double nanocapsule as a novel multifunctional carrier for drug delivery and cell imaging. International Journal of Nanomedicine. 2015;10:4149–4157.
DOI：10.2147/IJN.S83731
论文链接：https://doi.org/10.2147/IJN.S83731
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