Recombinant Human UBE3B蛋白怎么用

1. Human UBE3B是什么？催化机制有何不同？

UBE3B 全称 Ubiquitin protein ligase E3B，属 HECT 型泛素连接酶：泛素先转移到 HECT 结构域的催化半胱氨酸上，再交给底物，与 RING 型 E3 直接把泛素从 E2 转给底物的机制不同。货号 abs0712605 的 Recombinant Human UBE3B 蛋白对应 UniProt Q7Z3V4，覆盖 110 个氨基酸，理论分子量 57 kDa，种属 Human。做活性实验前先比对序列，确认片段是否落在 HECT 催化区域，否则反应很可能看不到结果。

2. Recombinant Human UBE3B蛋白怎么表达纯化？

货号 abs0712605 的 Recombinant Human UBE3B 蛋白表达系统为 HEK293。哺乳动物细胞培养在分子量较大的酶类上更稳，折叠与二硫键形成也更接近天然状态。标签 N-MBP&C-His，MBP 位于 N 端提升融合蛋白溶解度，His 位于 C 端用于镍柱亲和捕获。洗脱后收集主峰，SDS-PAGE 核对 57 kDa 条带，OD280 定量，随即分装冻存。

3. UBE3B重组蛋白能做哪些实验？

UBE3B 重组蛋白的用法大致有六类：体外泛素化 assay，与 E1、E2、泛素及候选底物共孵育；His Pull-down 钓底物或调节因子；Western blot 作抗体特异性验证的阳性对照；ELISA 包被后筛选抗血清；SPR/BLI 测与底物的结合常数；质谱用作定量内标。泛素化 assay 对蛋白活性状态最敏感，活性下降往往先于条带变化出现。

4. UBE3B蛋白怎么用PBS复溶与冻存？

产品页给明复溶介质为 Phosphate buffered saline。冻干粉先离心，让粉末沉到管底，再加 PBS 至目标浓度，室温静置数分钟，轻吹混匀，避免涡旋。溶解后立即按单次用量分装，-20℃ 保存，标注效期 12 months，并写明 Avoid repeated freeze-thaw cycles。需要连续多天使用时，把当天要用的那一小份放 4℃，其余继续冻存。

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