一文读懂泛素化修饰，内源泛素化检测如何破局？

什么是泛素化修饰？

蛋白质并非翻译完成后就一成不变，泛素化是真核生物中十分关键的蛋白质翻译后修饰，相当于细胞内一套蛋白 “标签标记系统”。该修饰依靠E1 泛素激活酶、E2 泛素结合酶、E3 泛素连接酶三类酶协同完成。在 ATP 供能下，E1 激活泛素分子，将其传递至 E2，再由 E3 识别特异性靶蛋白，把泛素共价标记到底物蛋白上。

依据标记形式，可分为单泛素化、多泛素化、多聚泛素化。不同泛素链标记，决定靶蛋白走向蛋白酶体降解、信号转导、蛋白转运等不同命运，广泛参与细胞凋亡、细胞自噬、DNA 损伤修复、免疫应答等生命进程。泛素化稳态失衡，和肿瘤、神经退行性疾病等多种疾病的发生发展高度相关。

内源泛素化检测的实验痛点

泛素化属于瞬时动态修饰，给科研检测带来不小挑战。细胞内存在大量去泛素化酶，样本处理过程中修饰极易被逆转丢失；传统实验多采用外源过表达泛素质粒开展检测，会人为拉高泛素本底，难以还原细胞真实生理状态，实验结果与体内真实情况存在偏差。如何高效捕获内源泛素化信号，是很多科研人员亟待解决的难题。

试剂盒方案：内源泛素化高效检测

针对内源泛素化检测难点，Cytoskeleton 品牌推出 Signal‑Seeker® Ubiquitination Detection Kit（BK161‑S）。

图三：细胞与组织样本总泛素化水平检测流程

图四：细胞组织样本中目标蛋白（POI）泛素化检测流程

试剂盒采用泛素化亲和磁珠，从细胞、组织裂解液中富集单泛素、多泛素、多聚泛素修饰蛋白。主要两大应用方向：检测样本总泛素化水平；富集修饰蛋白后，使用靶蛋白特异性抗体，检测目标蛋白（POI）的内源泛素化。

试剂盒全套配置齐全，包含裂解液、去泛素化酶抑制剂、蛋白酶抑制剂、洗涤与洗脱试剂。可用于研究瞬时调控机制、评估 PROTAC 作用效率、挖掘蛋白新型修饰位点，也可验证蛋白组学筛选得到的泛素化结果。

关键参数：样本输入 200 μg‑1 mg 裂解液；整体实验约 10 h，分两天完成。

产品详情链接：https://www.univ-bio.com/signal-seeker-ubiquitin/BK161-S.html