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发布人：上海陶术生物科技有限公司
发布日期:2026/9/23 9:59:13
▲ Ro5-3335 (T4687，CAS: 30195-30-3)的化学结构式
Ro5-3335 (T4687)，CAS: 30195-30-3 是一种针对核心结合因子（CBF）转录模块的小分子拮抗剂，功能性地作用于 RUNX1–CBFβ 复合体。CBF 由具 DNA 结合活性的 RUNX 亚基与稳定并增强其转录激活能力的 CBFβ 组成，调控造血命运决定与谱系成熟等关键基因。Ro5-3335 在报告基因实验中抑制 RUNX1/CBFβ 依赖的转激活，并抑制 RUNX1 与 CBFβ 的转录调控，从而降低 CBF 驱动的基因表达输出。机制上，该化合物在 DNA/RNA 合成层面限制由系谱决定性转录因子复合体介导的启动子近端激活。
这一拮抗效应在对 CBF 输出依赖性较高的生物系统中表现突出。于斑马鱼胚胎中，Ro5-3335 削弱 RUNX1 依赖的造血，符合 RUNX1 在造血内皮规范与限定性造血中的保守作用。在人类白血病研究中，CBF 融合蛋白（例如由染色体重排产生的 RUNX1 或 CBFβ 融合体）重塑转录网络以利于白血病程序。Ro5-3335 对携带 CBF 融合蛋白的人源白血病细胞系表现出选择性杀伤（IC50 = 1.1 μM），并在小鼠模型中降低白血病负荷，提示 CBF 重排状态对 CBF 轴抑制存在脆弱性。由此，Ro5-3335 既可作为化学探针评估白血病细胞对 RUNX1–CBFβ 转录激活的依赖，也可用于体内解析谱系指令性转录回路。
在通路层面，RUNX1–CBFβ 通过与染色质调控与共激活复合体协同，驱动 RNA 聚合酶 II 依赖的靶基因转录。Ro5-3335 通过抑制 RUNX1/CBFβ 转激活，进而调制下游控制增殖、生存与分化的基因网络。鉴于 CBF 融合蛋白同样劫持这些网络，该化合物为解析异常转录因子活性及其表型输出提供了便捷切入点。
此外，Ro5-3335 还是 Tat 拮抗剂，并可在体外抑制 HIV-1 复制。Tat 是病毒从 LTR 高效转录所必需的转激活因子，因而 Ro5-3335 亦可作为研究宿主—病毒 RNA 合成控制的工具。综合而言，Ro5-3335 适用于：（i）基于报告基因与基因组学的 CBF 依赖转录阻断评估；（ii）RUNX1 调控造血与白血病转化的机制研究；（iii）Tat 依赖的 HIV 转录动力学分析。其在 CBF 融合阳性模型中的选择性活性与在斑马鱼和小鼠体系中的稳健表型，凸显其作为跨平台转录调控化学探针的价值。
Ro5-3335 (T4687) 在本文被描述为一种小分子抑制剂，靶向RUNX1与CBFβ的相互作用，并阻断由该复合物介导的转录激活。作者指出，Ro5-3335 的设计目的即是干预这一特定的蛋白—蛋白结合界面，其功能特征体现在抑制RUNX1/CBFβ产生的转录激活。结合文中对RUNX1相关转录调控的研究语境，Ro5-3335 被定位为通过直接靶向该相互作用来影响RUNX1–CBFβ驱动的转录程序的化合物。由此，Ro5-3335 的作用机制在文中被呈现为通过阻断转录激活来降低RUNX1与CBFβ协同产生的转录输出，与其作为选择性调制该相互作用的小分子特征相一致。[1]
▲ 通过小鼠生存率分析、肝功能指标检测、组织病理学评分、肝脾大体及重量变化、qPCR及ELISA检测证实，Ro5-3335可有效改善由P.acnes/LPS诱导的急性肝损伤，表现为降低血清转氨酶和炎症因子水平、减轻肝脏病理损伤及提高生存率
Ro5-3335 (T4687) 被用于抑制RUNX1，研究在体内外通过使用该化合物抑制RUNX1证实了EZH2调控的免疫反应。于EZH2缺失的树突状细胞条件下，Ro5-3335 抑制RUNX1可恢复LPS诱导的活化以及树突状细胞与T细胞的应答，显示其在该背景下促进关键免疫功能的重建。在体内，研究者验证Ro5-3335 在Ezh2D−/−小鼠中促进了暴发性肝功能衰竭的进展。与此一致，病理学分析显示，接受Ro5-3335 的肝组织出现更大的结节并伴有更严重的淋巴细胞浸润。另外，在Ezh2D−/−小鼠中，给予Ro5-3335 后肝脾重量增加，高于仅接受丙酸杆菌致敏的小鼠。上述结果共同表明，在EZH2缺失背景下，Ro5-3335 通过抑制RUNX1可恢复树突状细胞的活化并增强其与T细胞的应答，同时在细菌诱导的肝损伤模型中伴随更为显著的肝脏炎症病理与疾病进展。[2]
▲ 通过Western blot、细胞耗氧率测定、小鼠急性冷暴露实验（含直肠体温、生存率、iWAT中产热和线粒体基因的qPCR及UCP1蛋白检测、H&E和UCP1免疫组化）证实，Ro5-3335可上调UCP1蛋白及产热相关基因表达、增强棕色脂肪细胞耗氧能力、提高冷暴露小鼠的体温与生存率，并促进iWAT棕色化，从而有效增强机体产热功能。
Ro5-3335 (T4687) 在本研究中被用作RUNX1抑制剂，小鼠以15 mg/kg剂量腹腔注射，连续7天。于分化的棕色脂肪细胞中，应用该化合物的药理抑制提高了UCP1的mRNA与蛋白水平。线粒体功能在暴露于Ro5-3335后得到改善，氧耗率分析显示呼吸能力提升。体内实验中，给予Ro5-3335的小鼠在低温应激下展现出更高的核心体温与更佳的存活率，指示产热能力增强。分子层面上，Ro5-3335上调了包括Ucp1、Pgc1α与Ebf2在内的产热相关基因表达，显示热生热程序被激活。组织学评估进一步发现，腹股沟白色脂肪组织脂肪细胞体积减小且UCP1表达升高，体现白色脂肪褐变的增强。上述结果共同表明，Ro5-3335能够增强脂肪细胞的产热装置，提升线粒体功能，提高机体在寒冷条件下的耐受表现，并促进与脂肪组织产热相关的基因表达与形态学改变。[3]
▲ 经不同浓度Ro5-3335处理后，表达Ki-67的巨噬细胞比例呈浓度依赖性降低。
Ro5-3335 (T4687) 被用于体外研究与CBFβ相关的肺泡巨噬细胞增殖。文中将Ro5-3335描述为可抑制CBFβ与RUNX1相互作用的小分子，并在10 ng/ml GM-CSF存在下对细胞施加不同浓度处理。研究以Ki-67阳性细胞百分比作为增殖指标，在0、50与100 μM条件下进行测定。在100 μM条件下，Ro5-3335抑制了肺泡巨噬细胞的增殖。结合所述给药条件与检测终点，这些结果表明Ro5-3335可功能性阻断CBFβ–RUNX1轴，并在GM-CSF刺激环境中降低肺泡巨噬细胞的增殖，且增殖以Ki-67表达为指标在既定浓度范围内得到评估。[4]
Ro5-3335作为一种小分子拮抗剂，通过阻断RUNX1与CBFβ的相互作用，抑制该核心结合因子复合体介导的DNA/RNA合成水平的转录激活。文献显示，Ro5-3335有效抑制RUNX1/CBFβ依赖的基因表达，选择性杀伤携带CBF融合蛋白的白血病细胞，削弱斑马鱼中RUNX1驱动的造血过程，并在EZH2缺失模型中恢复树突状细胞活化，调节免疫反应。此外，该化合物通过上调产热基因增强脂肪细胞的产热能力，并通过干扰CBFβ–RUNX1轴抑制肺泡巨噬细胞增殖。未来研究可聚焦于利用Ro5-3335作为化学探针深入解析RUNX1–CBFβ依赖的转录网络，探索其在免疫调控及炎症疾病中的治疗潜力，并进一步研究其在HIV转录调控中的双重作用。
[1] Cui X, Huo D, Wang Q, Wang Y, Liu X, Zhao K, et al.. RUNX1/NPM1/H3K4me3 complex contributes to extracellular matrix remodeling via enhancing FOSL2 transcriptional activation in glioblastoma. Cell Death & Disease. 2024;15(1):.
[2] Wang Y, Wang Q, Wang B, Gu Y, Yu H, Yang W, et al.. Inhibition of EZH2 ameliorates bacteria-induced liver injury by repressing RUNX1 in dendritic cells. Cell Death & Disease. 2020;11(11):.
[3] Wang C, He N, Wang S, et al. Inhibition of adipocyte RUNX1/2 enhances adipose tissue thermogenesis through distinct mechanisms. Nat Commun. 2026;17(1):4748.
[4] Wu Y, Zhu B, Zhang R, Goplen N, Gao X, Narasimhan H, et al.. Single cell RNA sequencing reveals mechanisms underlying a senescence-like phenotype of Alveolar Macrophages during Aging. . 2022;():.
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