【TargetMol 明星分子】MIK665：精准拮抗Mcl-1，驱动线粒体途径凋亡的新利器

■ 1. 背景介绍

MIK665 (T12629L)，CAS: 1799631-75-6 是一种针对 Bcl-2 家族凋亡通路的化学探针，靶向抗凋亡蛋白 Mcl-1。在线粒体依赖的内源性凋亡程序中，Mcl-1 通过结合并中和 BH3-only 蛋白，同时限制效应分子 BAX/BAK 的活化，从而抑制线粒体外膜通透化（MOMP）、细胞色素 c 释放以及级联性半胱天冬酶的激活 [1,2]。MIK665 与 Mcl-1 相互作用后，打破这一生存轴，使 Bcl-2 家族相互作用的平衡转向促凋亡方向，特别是在依赖 Mcl-1 维持线粒体稳态的细胞中作用显著。

在机制层面，MIK665 拮抗 Mcl-1 的经典 BH3 结合沟槽，置换其所结合的 BH3-only 伙伴，并解除对 BAX/BAK 的抗凋亡束缚。由此，BAX/BAK 得以活化并在外线粒体膜上聚集，诱发 MOMP，随后触发起始与效应半胱天冬酶的活化，完成凋亡程序 [1,2]。在骨髓系白血病研究模型中，Mcl-1 往往是主导性的生存决定因子，对 Mcl-1 的选择性失活可降低凋亡阈值并促进线粒体通路启动，从而产生对白血病细胞活性的抑制效应。

MIK665 可作为解析 Bcl-2 家族信号网络的工具分子，用于功能性验证 Mcl-1 依赖性，刻画抗凋亡守护者（Mcl-1、BCL-2、BCL-XL）之间的分工，并考察在选择性抑制 Mcl-1 时 BH3-only 哨兵（如 BIM、PUMA、NOXA）的再分配 [1,2]。在实验操作上，将 MIK665 处理与 BH3 profiling、线粒体去极化的实时监测、细胞色素 c 释放检测以及半胱天冬酶3/7 活性读出相结合，可捕获内源性凋亡的时序与动力学。通过 BAX/BAK 的遗传干预可进行通路连锁验证，而监测 NOXA 或 BIM 水平有助于阐明以 Mcl-1 占位为核心的敏感性决定因素。

鉴于抗凋亡“缓冲”在 Bcl-2 家族成员间具有一定冗余性，MIK665 亦适用于组合扰动，用以解析共依赖关系。与功能性抑制 BCL-2 或 BCL-XL 的分子联用，可揭示代偿性重排以及在何种条件下 Mcl-1 成为控制节点。在骨髓系白血病模型中，此类组合有助于界定凋亡景观、识别 Mcl-1 依赖的生物标志并探索跨网络转移的生存负荷。总体而言，MIK665 为精确扰动 Mcl-1 控制点、研究线粒体凋亡机制提供了有效工具，并支持在骨髓系体系中围绕 Mcl-1 支配的命运决策开展机制驱动的发现研究 [1,2]。

■ 2. 文献分享

■ 2.1 Potentiation of apoptosis in drug-resistant mantle cell lymphoma cells by MCL-1 inhibitor involves downregulation of inhibitor of apoptosis proteins

▲ AZD5991与venetoclax联合在依鲁替尼和/或venetoclax敏感及耐药细胞系中诱导合成致死并增强细胞凋亡

MIK665 (T12629L) 被界定为一款作用于MCL-1的抑制剂。在本研究中，MIK665 在Mino与JeKo-1两种套细胞淋巴瘤细胞系中均导致抑制性凋亡蛋白（IAPs）水平下调。研究者在Mino细胞中对经MIK665处理后的IAPs进行了检测，并采用了该实验系列中规定的处理时程。综合结果表明，MIK665 通过作用于MCL-1通路，在多种MCL细胞模型中降低IAPs水平，契合研究对促凋亡信号机制的关注。[3]

■ 2.2 Predictors of response and rational combinations for the novel MCL-1 inhibitor MIK665 in acute myeloid leukemia.

▲ MIK665与venetoclax联合在获得性venetoclax耐药的AML细胞系中具有协同作用。

MIK665 (T12629L) 是一种MCL-1抑制剂。针对急性髓系白血病骨髓样本的离体分析显示，对MIK665的药物敏感性得分分布范围为34.9至5.2；剂量–反应数据显示，白细胞在敏感/中等/耐药组的IC50分别为5.4、45和134.8 nM，原始细胞为2、44.1和158.4 nM，单核细胞为3.8、14.5和22.9 nM，淋巴细胞为52.6、97.3和84.5 nM。结果指出，MIK665对向单核系分化的AML细胞尤其有效。分子层面上，ABCB1与BCL2L1表达与MIK665敏感性呈显著负相关，而LILRA2、IL17RA及FCGR1A（CD64）表达与较高的MIK665药物敏感性得分相关，更分化的FAB M4/M5表型对MIK665更敏感。联用研究显示，在ABCB1高表达样本中，ABCB1抑制剂与MIK665的组合获得显著更高的DSS与协同效应，支持通过共同靶向克服以ABCB1为特征的耐药。MIK665与venetoclax的组合在MIK665耐药样本及venetoclax耐药样本中均产生显著更高的DSS与协同效应，且与A1331852的组合在原发venetoclax耐药样本中亦显示有效。[4]

■ 2.3 Src inhibition potentiates MCL-1 antagonist activity in acute myeloid leukemia.

▲ MCL-1抑制剂/SKI-606方案杀伤原代AML原始细胞而不影响正常CD34⁺细胞，并阻断STAT3磷酸化（p-Y705）及下调MCL-1。

MIK665 (T12629L) 与Src抑制剂SKI-606联合可降低STAT3在Tyr705与Ser727位点的磷酸化，减少p-STAT3的核转位，并抑制MCL-1转录，同时下调MCL-1、c-MYC和BCL-xL。在U937与MV4-11白血病细胞中，该联合促进BAX与BAK的构象激活，阻断MCL-1与BAK的结合，并增加BAX与BAK的共沉淀；上述变化伴随PARP与caspase-3的切割。对线粒体通路的依赖性体现在：在BAX或BAK敲除，尤其双基因敲除细胞中，SKI-606 + MIK665的杀伤显著降低。STAT3及其靶标的功能相关性也得到验证：构成型活性STAT3显著保护细胞免受MIK665/SKI-606影响，并减弱对MCL-1、c-MYC和BCL-xL的下调；而在U937细胞中，外源表达c-MYC或BCL-xL均使其对SKI-606/MIK665联合显著不敏感。在MV4-11细胞中，SKI-606 + MIK665引发明显的K48型降解性泛素化与强烈的NOXA诱导，且在U937细胞中观察到相同结果。在原代CD34+ AML细胞中，MIK665 + SKI-606表现更为显著。[5]

■ 2.4 The tubulin polymerization inhibitor gambogenic acid induces myelodysplastic syndrome cell apoptosis through upregulation of Fas expression mediated by the NF-κB signaling pathway.

▲ GNA诱导的细胞周期阻滞。MDS-L细胞以2 µM GNA孵育24 h，分析前以BrdU标记4 h。

MIK665 (T12629L) 是一款MCL-1抑制剂。本研究中，MIK665可上调MDS-L细胞的Fas mRNA与蛋白表达，并与GNA联合时对Fas的上调呈现协同效应。相较于单用GNA，加入MIK665可在MDS-L、SKM-1、MDS-EB1及MDS overt AML细胞中进一步抑制细胞增殖，并进一步提高caspase 3/7活性。剂量组合实验显示，3 μM GNA + 50 nM MIK665、6 μM GNA + 50 nM MIK665、1 μM GNA + 50 nM MIK665、以及10 μM GNA + 50 nM MIK665分别在MDS-L、SKM-1、MDS-EB1与MDS overt AML细胞中几乎完全抑制细胞生长。上述结果表明，MIK665能够增强细胞凋亡并抑制生长，且与GNA联合时作用更为显著。[6]

■ 3. 结语

MIK665通过拮抗抗凋亡蛋白Mcl-1的BH3结合位点，置换其结合的BH3-only蛋白，释放促凋亡效应分子BAX/BAK，进而诱发线粒体外膜通透化、细胞色素c释放及半胱天冬酶激活，完成细胞凋亡。文献报道显示，MIK665可在套细胞淋巴瘤中降低凋亡抑制蛋白水平，在急性髓系白血病中对单核系分化细胞尤为有效，并能与Src抑制剂、venetoclax及微管抑制剂等联合使用，显著增强促凋亡效应。未来研究可聚焦于联合抑制Bcl-2家族共依赖成员、寻找预测药物反应的生物标志物，以及深入解析Mcl-1在血液系统肿瘤中凋亡调控网络的重构机制。

■ 4. Q&A

Q1: MIK665的主要分子靶点及作用机制是什么？

A1: MIK665主要靶向抗凋亡蛋白Mcl-1，通过结合其BH3结合位点，置换BH3-only蛋白，释放BAX和BAK，激活线粒体途径凋亡。

Q2: 文献中MIK665在哪些血液系统肿瘤中表现出显著活性？

A2: MIK665在套细胞淋巴瘤中通过降低IAPs表现出活性，在急性髓系白血病中特别对单核系分化细胞有效，并在联合用药中展现协同效应。

Q3: MIK665如何与其他治疗药物协同增强凋亡效应？

A3: MIK665与Src抑制剂SKI-606联合抑制STAT3信号，促进BAX/BAK活化；与venetoclax联合克服耐药；与微管聚合抑制剂甘柏酸联合增强Fas表达和细胞凋亡。