哮喘模型“螨”门深似海：Der p和Der f怎么选？ ——附体外细胞/体内小鼠全套标准化方案

导语：想研究激素抵抗型重症哮喘？用屋尘螨（Dermatophagoides pteronyssinus, Der p）。想研究气道纤维化与重塑？用粉尘螨（Dermatophagoides farinae, Der f）。想模拟临床最普遍的双重致敏人群？1:1混合。选错尘螨，轻则表型不符，重则结论偏差——本文讲清体外/体内全流程、双螨差异及避坑要点，结合ELV34脂质介质抗炎抗衰老前沿研究，助你一次造模成功。

一、为什么选择尘螨模型？比OVA更贴近临床

屋尘螨（Der p）和粉尘螨（Der f）是全球85% 过敏性哮喘患者的主要室内变应原。基于尘螨提取物构建的模型，能同时激活固有免疫 + 适应性Th2/Th17通路，模拟嗜酸/中性粒细胞混合炎症、气道重塑、上皮衰老、激素抵抗等真实病理特征，远优于OVA（卵清蛋白）人工模型。

二、三类尘螨模型适用场景总览

三、体外细胞模型（HNEpC）——标准化操作+ELV34前沿干预方案

基于2021年Preprints权威研究[2]，人鼻上皮细胞（HNEpC）是尘螨过敏体外金标准模型，可验证脂质介质Elovanoid 34（ELV34）的抗炎、抗衰老、抑制自噬/UPR/MMP的治疗作用。

✅ 材料清单（标准化商用试剂）

• 细胞：原代人鼻上皮HNEpC（PromoCell C-1260）

• 刺激物：Der p提取物（abs47039044）、Der f提取物（abs47039045）

• 混合组配置：15 μg/mL Der p + 15 μg/mL Der f（终浓度30 μg/mL）

• 培养基：气道上皮专用完全培养基 + 双抗

• 干预药物：ELV34（终浓度500 nM，文献标准给药浓度）

• 检测试剂：LDH细胞毒性试剂盒(abs580236)、PrestoBlue活力试剂、炎症因子ELISA、自噬/UPR/MMP/衰老qPCR引物

📌 标准化3步操作流程

1. 铺板培养：HNEpC接种培养至80%汇合度（约3d），筛选状态饱满、无漂浮死细胞的细胞用于实验；限定P2-P3代次使用。

2. 分组干预：设置空白对照组、Der p组、Der f组、1:1混合尘螨组；统一终浓度30 μg/mL刺激；药物组：尘螨刺激30 min后加入ELV34（500 nM）共孵育24h；设置单独ELV34空白给药对照、PBS溶剂对照。

3. 样本收集与检测

• 细胞上清：ELISA检测IL-1β、IL-6、IL-8、CXCL1、CCL2、VEGF、IL-10

• 细胞沉淀：qPCR检测自噬（ATG3/5/7、Beclin1）、UPR（ATF6、CHOP、IRE1）、MMP（MMP2/9/12）、衰老（p21/p16/p27）

• 细胞功能学：LDH细胞毒性、PrestoBlue细胞活力、β-半乳糖衰老染色

四、体内小鼠模型——36天完整重塑方案 vs 5周快速筛选方案

🐭 基础实验材料

• 实验动物：5~6周龄雌性BALB/c（雌性炎症反应更稳定，重复性高）

• 刺激试剂：Der p/Der f提取物 + 氢氧化铝佐剂

• 造模方式：经典「腹腔致敏+滴鼻激发」双阶段模型

• 检测样本：BALF、肺组织、血清、肺功能参数

📅 36天标准完整流程（气道重塑/纤维化研究专用）

🧪 体内终点全套检测指标

💡 参数速解：Rrs（总气道阻力）、Rn（中央气道阻力）=气道堵塞程度；G（组织阻尼）=炎症粘滞性；H（组织弹性）=肺纤维化/组织僵硬核心指标，是Der f重塑更严重的关键证据。

⏱ 5周快速简化方案（药物/益生菌初筛、肠-肺轴首选）

1. 无需腹腔致敏，每周连续5天滴鼻刺激（25 μg/只），持续5周；

2. 干预组造模前7天开始给药，全程同步干预；

3. 终点检测：BALF炎症、肺组织病理评分、血清IgE、肠道菌群。

五、Der p vs Der f 核心差异+选型决策树（重点）

依据Wang等2020平行对照研究[4]，两种尘螨病理表型差异极大，直接决定实验结论方向：

🧭 选型决策口诀

激素抵抗用Der p，纤维重塑选Der f；双重致敏1:1，体外细胞任你挑。

六、造模避坑指南（6条质控铁律）

参考文献