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OMIP-017:13色panel实现辅助T细胞的精细流式分型

发布人:普健生物(武汉)科技有限公司

发布日期:2026/1/28 10:16:06

无需刺激,一管搞定Th全谱+Tfh分型

OMIP-017通过趋化受体组合策略,直接从稳态表型读出功能偏向与迁移潜能,让CD4⁺ T 细胞精细分型真正适配高通量临床场景——这正是该方案被广泛引用的原因。

 

传统方法的局限

细胞因子刺激分群依赖诱导条件,受细胞活性、样本窗口限制,批间差异大,临床样本常常"等不起"。

 

OMIP-017的突破

基于趋化受体的稳态表型分析,无需刺激即可同步呈现Th谱系功能取向与迁移潜能,稳定可重复。

 

辅助T 细胞的功能偏向与组织分布高度依赖趋化受体的组合表达。OMIP-017通过将CCR4、CCR6、CCR10、CXCR3 等标记纳入同一体系,在无刺激条件下即可同时呈现Th谱系的功能取向与迁移潜能;并与CXCR5 共同使用,使Tfh 及其功能偏向能够与经典Th 轴一体化呈现

一、方案指标

靶标荧光素作用abinScience推荐
Live/Dead
AqBlu

排除死细胞


CD3
Alexa 594
T细胞指标
CD4
QD800
查看CD4抗体
CD8
QD585
查看CD8抗体
CXCR5
Alexa 647
Tfh细胞核心标志
CCR4
PE-Cy7
Th亚群的趋化因子受体
(Th1/Th2/Th17/Th22分型关键)
CCR6
BV605
查看CCR6抗体
CCR10
PE
查看CCR10抗体
CXCR3
PE-Cy5
查看CXCR3抗体
CCR7
Alexa 680
细胞分化状态
(记忆/效应/耗竭表型)
CD45RA
QD655

CD161
FITC
查看CD161抗体
PD-1
BV421
查看PD-1抗体

二、圈门策略

新闻图片1

图1. OMIP-017圈门策略总览

 

1、排除粘连与死细胞

CD3 vs Aqua Blue双参数图,门选CD3⁺Aqua⁻群体,排除自发荧光干扰与死细胞,再用FSC/SSC找到更纯粹的主要细胞群。

2、锁定CD4⁺ helper T群体

CD4/CD8双参数图门选CD4⁺CD8⁻ 群,获得纯净的辅助T细胞群体。

3、Tfh与经典Th轴分流

CXCR5 区分Tfh(CXCR5⁺)Non-Tfh(CXCR5⁻)Tfh 可覆盖在CD4⁺T 细胞上分析其独特表型。

4、趋化受体解析Th亚群

根据CCR4、CCR6、CCR10 CXCR3 的差异表达,精细区分Th1、Th2、Th17、Th22等功能亚群。

 

三、实验结果展示

Step 1 | 去粘连,圈出CD4⁺T细胞群

CD3 Aqua 找到活主细胞群,排除染料粘连,再用FSC/SSC找到更纯粹的主要细胞群,CD4/CD8 圈出CD4⁺T 细胞群。

新闻图片2

 

Step 2 | 分析Tfh细胞表型

CD4⁺T 细胞群中圈出CXCR5⁺ Tfh 细胞群,分析Tfh 细胞(蓝色)覆盖在CD4⁺T 细胞(灰色)上,研究Tfh 细胞的独特表型。

新闻图片3

 

Step 3 | 趋化受体区分Th亚群

根据趋化因子受体CCR4、CCR6、CCR10CXCR3 的差异表达区分不同Th 细胞功能亚群。

新闻图片4

 

四、方案解读

1. 采用"趋化受体组合"定义Th亚群,让分群同时反映组织迁移潜能+功能偏好

OMIP-017的核心创新之一在于采用趋化受体谱来划分Th 亚群,而非依赖细胞因子或转录因子。这些受体不仅指示细胞的功能偏向,同时反映其组织归巢特性,例如CCR6/CCR10与黏膜及皮肤趋向相关,CXCR3则对应炎症迁移倾向。该策略使得Th分群在无需刺激的条件下即可完成,既避免了刺激诱导的可变性,又提高了实验效率和样本适用性,为临床样本及大规模队列研究提供了稳定、可重复的分析方案。

2. 在单一panel中同时实现Th与Tfh细胞亚群的整合检测

OMIP-017 发表时,滤泡辅助T细胞(Tfh)作为新兴热点,其研究往往独立于经典的Th1/Th2/Th17 谱系。OMIP-017 通过在同一管中结合Tfh标志物CXCR5 Th 亚群的趋化受体,实现了两类细胞群体的同步检测。这一设计不仅允许研究者一次性获取完整的helper T cell 分布信息,也直接推动了对Tfh1、Tfh2 等功能性亚群的认知,从而将体液免疫调控的理解提升至系统网络的层面。

 

五、适用研究方向

【自身免疫病(SLE、RA)】【疫苗评价与抗体应答】【肿瘤免疫微环境】【感染性疾病】【移植免疫监测】【临床队列研究】

无论是监测SLE/RA 患者外周血Tfh/Th17 比例、评估疫苗接种后Tfh 应答与抗体滴度的相关性,还是分析肿瘤浸润淋巴细胞(TIL)中Th 亚群分布与预后的关联,OMIP-017 都能提供稳定可靠的分型框架。

 

六、小结

OMIP-017 的意义在于把helper T cell 的解析从"刺激后看功能"转向"稳态表型读出功能倾向与迁移路径"。趋化受体组合构成了一个更稳定、更可比较的分群维度,使外周血样本能够在无刺激条件下呈现Th 轴与Tfh 轴的整体结构。同时将Tfh Th 纳入同一体系,也为后续研究提供了一个更贴近真实免疫网络的观察框架。

 


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参考文献

[1] Mahnke YD, Beddall MH, Roederer M. OMIP-017: human CD4(+) helper T-cell subsets including follicular helper cells. Cytometry A. 2013 May;83(5):439-40. DOI: 10.1002/cyto.a.22269

[2] Morita R, et al. Human blood CXCR5⁺CD4⁺ T cells are counterparts of T follicular cells and contain specific subsets. Immunity. 2011;34(1):108-121. DOI: 10.1016/j.immuni.2010.12.012

[3] Acosta-Rodriguez EV, et al. Surface phenotype and antigenic specificity of human interleukin 17–producing T helper memory cells. Nat Immunol. 2007;8(6):639-646. DOI: 10.1038/ni1467

 

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