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发布人:上海博湖生物科技有限公司
发布日期:2025/12/1 14:47:36
ELISA加样器操作需严格控制角度、速度和污染风险,核心规范包括45度角加样、避免气泡与孔壁残留、更换吸头及定期校准。
操作核心原则
角度控制:加样枪吸头与板条呈45度角,贴孔壁加样,避免90度垂直滴加导致液体残留。
速度与力度:加样不可过快,防止液体溅出或产生气泡;吸头勿伸入孔内接触孔底,以免污染或压弯吸头。
污染防控:每次加样更换吸头,稀释样本时在微型振荡器上混匀1分钟,避免交叉污染。
加样前准备:
确保微量加样器已校正,以保证加样量的准确性。
加样器应垂直加入标本或试剂,避免刮擦包被板底部。
每次加样前,确保加样器吸头干净,避免污染。
校准与预洗
使用前需校准加样器,确保量程准确。
新吸头需预洗(吸入并排回液体),消除内壁液膜误差。
加样技巧:
加样过程中,滴瓶加液不如加样器好,滴瓶不易控制加液量不准,造成显色不统一。
加样时垂直悬空加入液体,避免加在孔壁上,不可产生气泡。
避免加样枪漏气,加样的量不够,不能用枪吸出再加,需做相应记录。
加样后处理:
加完显色液后,放入一个可推拉的抽屉内,避光振荡。
每孔先加入显色剂A50μl,再加入显色剂B50μl,轻轻震荡混匀,37℃避光显色10分钟。
终止时,每孔加终止液50μl,终止反应,15分钟内读取OD值。
注意事项
漏气时不可补加,需记录并更换设备。
加样顺序一致,尤其底物和终止液需同步操作。
避免吸头接触孔壁,防止交叉污染。
遵循这些规范,可以确保ELISA实验的准确性和重复性。
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