WB实验膜选择攻略--NC膜vs PVDF膜

蛋白质免疫印迹（WB）实验中，转膜是连接电泳与检测的 “桥梁”—— 膜的选择直接影响蛋白结合效率、信号强度、背景噪音，甚至实验成本！选错膜可能导致：目标条带模糊、非特异性条带泛滥、抗体浪费，严重时直接让实验功亏一篑。 而 NC 膜（硝酸纤维素膜）和 PVDF 膜（聚偏氟乙烯膜）作为 WB 的 “两大主力膜”，没有绝对的优劣，只有 “适配与否”。今天就从 3 个核心维度，帮你精准匹配实验需求～

一、核心对比

NC膜vs PVDF膜，一张表看清差异

二、实操选择指南：不同场景怎么选？

1. 优先选 PVDF 膜的情况

• 目标蛋白是小分子（＜20 kDa，如细胞因子、短肽）或低丰度蛋白（如信号通路蛋白、稀有抗原）；

• 需要重复利用膜（如同一膜检测多个目标蛋白，节省样品和抗体）；

• 实验周期长，需要长期储存膜（如转膜后暂时不检测，后续复苏）；

• 抗体价格昂贵，希望提高结合效率、减少抗体浪费；

• 做蛋白测序、质谱分析（PVDF 膜兼容测序流程，NC 膜易降解）。

2. 优先选 NC 膜的情况

• 常规 WB 实验，目标蛋白是中等 - 大分子（＞20 kDa）、丰度较高（如内参蛋白 GAPDH、β-actin）；

• 对背景噪音要求高（如荧光 WB、化学发光高灵敏度检测）；

• 实验预算有限，需要批量处理样品；

• 新手操作，希望简化流程（无需甲醇激活，容错率更高）。

三、关键操作提醒：避免踩坑！

1. PVDF 膜使用注意事项

• 转膜前必须用 100% 甲醇浸泡 10-30 秒激活（关键步骤！未激活的 PVDF 膜几乎不结合蛋白）；

• 转膜缓冲液可加入 20% 甲醇（增强小分子蛋白的转移效率）；

• 封闭液可根据抗体类型选择：抗血清、多克隆抗体用 5% 脱脂牛奶，单克隆抗体、磷酸化抗体优先选 5% BSA（减少非特异性结合）；

• 洗膜时可适当增加洗膜次数（3 次 ×10 分钟），用 TBST 缓冲液（含 0.1% Tween-20），降低背景噪点；

• 重新孵育时，用 stripping buffer 洗脱一抗后，需充分洗膜再孵育新抗体，避免交叉反应。

2. NC 膜使用注意事项

• 转膜缓冲液无需加甲醇（甲醇会降低 NC 膜的蛋白结合能力）；

• 转膜后立即封闭，避免膜干燥（干燥后蛋白结合位点会失效，条带模糊）；

• 洗膜时用温和的摇速，避免膜破裂（NC 膜韧性较差）；

• 封闭液优先选 5% 脱脂牛奶（与 NC 膜兼容性更好，背景更低）。

四、总结

• 常规实验、大分子高丰度蛋白、预算有限→选 NC 膜；

• 小分子 / 低丰度蛋白、重复利用、关键实验→选 PVDF 膜！

• 其实 WB 膜的选择没有绝对标准，核心是 “适配目标蛋白和实验需求”。如果不确定，也可以做平行实验：用两种膜同时转膜，对比条带清晰度和背景，找到最适合自己实验的方案～

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