Aloxistatin，阿洛司他丁 | MedChemExpress (MCE)

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Aloxistatin

MCE 国际站：Aloxistatin

品牌：MedChemExpress (MCE)

货号：HY-100229

CAS：88321-09-9

中文名称：阿洛司他丁

Synonyms：阿洛司他丁; E64d; E64c ethyl ester

纯度：99.55%

存储条件：粉末 -20°C 3 年 4°C 2 年 溶剂中 -80°C 2 年 -20°C 1 年

运输条件：美国大陆的室温；其他地方可能有所不同。

产品活性：Aloxistatin (E64d) 是可渗透细胞,不可逆的广谱半胱氨酸蛋白酶 (cysteine protease) 抑制剂。Aloxistatin (E64d) 可抑制 MERS-CoV。

生物活性：Aloxistatin (E64d) 是一种可渗透细胞且不可逆的广谱 cysteine protease 抑制剂。 Aloxistatin (E64d) 对 MERS-CoV 具有进入阻断作用。 IC50 和靶标：半胱氨酸蛋白酶^[1] 体外 抑制蛋白酶抗性朊病毒蛋白 (PrP-res) 在 ScNB 细胞中的积累半胱氨酸蛋白酶抑制剂 Aloxistatin (E64d)，IC₅₀ 为 0.5±0.11 μM。对于细胞表面 PrP-sen 检测，PrP-sen 从经过磷脂酰肌醇特异性磷脂酶 C (PIPLC) 处理的培养基中免疫沉淀，以从细胞表面释放脉冲-³⁵S-标记的 PrP-sen。除了对照细胞^[1]，所有细胞的标记培养基中的 Aloxistatin 分别维持在 15 μM。当与 NK-92 或 YT 5 细胞预孵育时，Aloxistatin (E64d)（特异性阻断半胱氨酸蛋白酶，但不阻断丝氨酸蛋白酶，如颗粒酶）能够完全阻断 CatL 底物 Z-Phe-Arg-aminomethylcoumarin 的周转<支持>[2]。 Aloxistatin (E64d) 是一种广谱的细胞渗透性半胱氨酸蛋白酶抑制剂^[3]。 体内：给豚鼠口服 Aloxistatin (E64d) 会导致脑、CSF 和血浆 Aβ(40) 和 Aβ(42) 剂量依赖性减少。 Aloxistatin 还引起脑 CTFβ 的双相剂量依赖性减少。 Aloxistatin 导致脑 sAβPPα 剂量依赖性增加。平均 sAβPPα 水平显着高于 5 mg/kg/天或更大的 Aloxistatin 剂量的无剂量组，最高 Aloxistatin 剂量导致 sAβPPα 的最大增加比对照组高约 54%。与 Aβ 效应类似，口服 Aloxistatin 会产生双相剂量依赖性脑组织蛋白酶 B 活性降低。最低有效剂量约为 1 mg/kg/天，最高 Aloxistatin 剂量导致脑组织蛋白酶 B 活性的最大降低，比对照组低约 91%。因此，Aloxistatin 降低豚鼠脑组织蛋白酶 B 活性的方式与化合物抑制组织蛋白酶 B β-分泌酶活性的方式一致^[4]。 Aloxistatin (E64d) 抑制大鼠 AT_1AR 和 ACE 基因表达的增加。 RNH-6270 或 Aloxistatin 的给药减少了 HF 大鼠心肌内冠状动脉超氧化物产生的增加^[5]。

体外：Aloxistatin (E64d) 抑制蛋白酶抗性朊病毒蛋白 (PrP-res) 在 ScNB 细胞中的积累，IC50 为 0.5±0.11 μM。对于细胞表面 PrP-sen 检测，PrP-sen 从经过磷脂酰肌醇特异性磷脂酶 C (PIPLC) 处理的培养基中免疫沉淀，以从细胞表面释放脉冲-35S-标记的 PrP-sen[1]。除了对照细胞，所有细胞的标记培养基中的 Aloxistatin 分别维持在 15 μM。当与 NK-92 或 YT 5 细胞预孵育时，Aloxistatin (E64d) (特异性阻断半胱氨酸蛋白酶，但不阻断丝氨酸蛋白酶，如颗粒酶) 能够完全阻断 CatL 底物 Z-Phe-Arg-aminomethylcoumarin 的周转[2]。Aloxistatin (E64d) 是一种广谱的细胞渗透性半胱氨酸蛋白酶抑制剂[3]。 MCE尚未独立证实这些方法的准确性。仅供参考。

体内：Aloxistatin (E64d) (灌胃) 会导致豚鼠的脑、CSF 和血浆 Aβ (40) 和 Aβ (42) 剂量依赖性减少。Aloxistatin 还引起脑 CTFβ 的双相剂量依赖性减少。Aloxistatin 导致脑 sAβPPα 剂量依赖性增加。平均 sAβPPα 水平显著高于 5 mg/kg/天或更大的 Aloxistatin 剂量的无剂量组，最高 Aloxistatin 剂量导致 sAβPPα 的最大增加比对照组高约 54%。与 Aβ 效应类似，口服 Aloxistatin 会产生双相剂量依赖性脑组织蛋白酶 B 活性降低。最低有效剂量约为 1 mg/kg/天，最高 Aloxistatin 剂量导致脑组织蛋白酶 B 活性的最大降低，比对照组低约 91%。因此，Aloxistatin 降低豚鼠脑组织蛋白酶 B 活性的方式与化合物抑制组织蛋白酶 B β-分泌酶活性的方式一致[4]。Aloxistatin (E64d) 抑制大鼠 AT1AR 和 ACE 基因表达的增加。RNH-6270 或 Aloxistatin 的给药减少了 HF 大鼠心肌内冠状动脉超氧化物产生的增加[5]。 MCE has not independently confirmed the accuracy of these methods. They are for reference only.

动物实验：小鼠和猪[4] 使用豚鼠（雄性，Hartley 品系，平均体重 400 克，相当于约 6 周大动物）。使用表达人类 AβPP 的雄性转基因小鼠，其中含有 wt β-分泌酶位点和 London 突变型 β-分泌酶位点序列。通过管饲法给药具有剂量准确的优点，但会造成创伤，因此仅适用于相对较短的给药期（最长约一周）。豚鼠研究采用管饲法给药。将阿洛司他汀悬浮在 Me2SO 中，浓度为所示浓度（0.1、1.0、5 和 10 mg/kg），每天使用喂食管管饲给药。载体对照动物仅通过管饲 Me2SO 进行治疗。大鼠[5] 使用雄性近交系 DS 大鼠。断奶大鼠喂食含有 0.3% NaCl 的实验室食物，直至 7 周龄。 DS 大鼠在 7 周后以 8% NaCl 饮食喂养，在 12 周时出现因高血压而引起的代偿性向心性左心室 (LV) 肥大，在 19 周时出现明显的致命性 LV 衰竭和肺充血阶段。因此，DS 大鼠从 7 周龄开始以 8% NaCl 饮食喂养，并在 12 至 19 周龄期间随机分为 HF 组、阿洛司他汀组（每天每公斤体重 10 毫克，每隔一天腹膜内注射）或 RNH-6270 组（每天 3 毫克/公斤饲料）（每组 n=10）。RNH-6270（ARB）和阿洛司他汀的剂量是在初步实验和先前研究中确定的。以 0.3% NaCl 饮食喂养的 DS 大鼠作为年龄匹配的对照（对照组，n=10）。 19周龄时，所有大鼠均通过腹膜内注射过量NSC 10816（50mg / kg）安乐死，并取出心脏进行生物学和组织学分析。从腹主动脉收集动脉血以测量肾素活性。每周使用非侵入性尾套法测量清醒大鼠的收缩压和心率，从7周龄开始。在单独的实验中，12周龄的DS大鼠从7周龄开始以低盐饮食喂养，以与上述实验相同的方式给予载体，RNH-6270或Aloxistatin（每组n = 5），并将用于测量靶向mRNA和蛋白质水平的LV组织立即放入液氮中并储存在-80°C下。MCE尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。

细胞实验：按照上述极性标记的方案，通过对增殖标记物 Ki67 或凋亡标记物裂解胱天蛋白酶 3 进行染色来评估细胞增殖和凋亡。MCF10 变体在 3D rBM 覆盖培养物中生长 4 天，并用 0.1% DMSO、5 μM CA074Me 或 5 μM 阿洛司他汀处理。使用蔡司 Axiophot 荧光显微镜对两个单独的盖玻片上的总共 100 个结构进行计数，以确定 Ki67 或裂解胱天蛋白酶 3 呈阳性的结构百分比。如果结构中至少有一个细胞被染色为 Ki67，则认为该结构为 Ki67 阳性。如果结构中至少有一个细胞对裂解胱天蛋白酶 3 呈阳性，并且阳性细胞不在发育管腔的中心，则认为该结构为胱天蛋白酶 3 阳性[3]。 MCE 尚未独立证实这些方法的准确性。它们仅供参考。

IC50 & Target：Cysteine protease[1]

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参考文献：

[1]. Doh-Ura K, et al. Lysosomotropic agents and cysteine protease inhibitors inhibit scrapie-associated prion protein accumulation. J Virol. 2000 May;74(10):4894-7.
[2]. Konjar S, et al. Human and mouse perforin are processed in part through cleavage by the lysosomal cysteine proteinase cathepsin L. Immunology. 2010 Oct;131(2):257-67.
[3]. Mullins SR, et al. Three-dimensional cultures modeling premalignant progression of human breast epithelial cells: role of cysteine cathepsins. Biol Chem. 2012 Dec;393(12):1405-16.
[4]. Hook G, et al. The cysteine protease inhibitor, E64d, reduces brain amyloid-β and improves memory deficits in Alzheimer's disease animal models by inhibiting cathepsin B, but not BACE1, β-secretase activity. J Alzheimers Dis. 2011;26(2):387-408.
[5]. Cheng XW, et al. Superoxide-dependent cathepsin activation is associated with hypertensive myocardial remodeling and represents a target for angiotensin II type 1 receptor blocker treatment. Am J Pathol. 2008 Aug;173(2):358-69.
[6]. Ji Yeun Kim, et al. Safe, High-Throughput Screening of Natural Compounds of MERS-CoV Entry Inhibitors Using a Pseudovirus Expressing MERS-CoV Spike Protein. Int J Antimicrob Agents. 2018 Nov;52(5):730-732.