荧光定量 PCR 与普通 PCR 的核心差异大盘点

实时荧光定量PCR（Real-time PCR）与普通PCR（Conventional PCR）在原理、操作、成本与设备、应用领域、结果分析等方面存在显著差异，具体区别如下：

操作流程

1、普通PCR：需要在PCR反应完成后进行电泳分析，操作相对繁琐，且无法实时监控扩增过程。

2、荧光定量PCR：整个过程可以在仪器上实时监控，自动化程度高，操作简便，速度快。

成本与设备

实时荧光定量PCR仪价格昂贵，运行成本高；普通PCR设备成本较低。

原理与检测机制

1、普通PCR：

又称“终点PCR”，通过高温变性、低温退火、适温延伸的循环反应扩增DNA片段，反应结束后需通过琼脂糖凝胶电泳或聚丙烯酰胺电泳对产物进行染色（如EB染色），根据条带亮度和位置判断产物的有无及片段长度。但该方法无法反映反应起始模板量，受扩增效率、样品差异等因素影响较大，仅能定性分析。

2、荧光定量PCR：

在反应体系中加入荧光染料（如SYBR Green）或荧光探针（如TaqMan探针），仪器在每轮循环中实时采集荧光信号强度。通过荧光信号累积曲线计算Ct值（荧光达到阈值时的循环数），结合标准曲线可精确量化起始模板浓度，实现对基因表达水平、病原体载量等的定量分析。

应用领域‌

1、普通PCR：主要用于定性分析，即判断目标序列是否存在。由于其结果依赖于凝胶电泳，通常用于确定基因的存在与否，适合于基因检测、疾病诊断等。

2、荧光定量PCR：不仅能够定性，还能定量分析目标DNA的量。它适用于需要精确测量基因表达水平、病毒载量、基因拷贝数等场合。

结果分析

1、普通PCR：结果解读依赖于电泳条带的亮度，无法直接定量。

2、荧光定量PCR：通过循环阈值（Ct值）来定量分析，可以精确测定未知反应中的模板DNA数量，适用于绝对或相对定量分析。

总结：

普通PCR是基础的定性扩增技术，成本低但无法定量；荧光定量PCR通过实时荧光监测实现了精确定量，功能更强大但成本较高。选择时需根据研究目标（定性/定量）、预算及效率要求综合判断：

l 定性检测或低成本需求：优先普通PCR；

l 定量分析或高精度需求：必须使用荧光定量PCR。