1YR企业会员
发布人：上海博湖生物科技有限公司
发布日期:2026/1/4 9:35:40
在ELISA实验中，气泡常出现在加样、包被、封闭、显色或洗涤等步骤。它们多聚集于酶标板孔的边缘，导致液体无法与孔壁充分接触，从而干扰抗原抗体结合或酶促反应。尽管说明书普遍提示“避免气泡”，但实际操作中仍易发生，需掌握科学方法加以规避。
气泡产生的主要原因
为打尽枪头内残液而快速弹射，造成空气卷入。
加样速度过快、角度垂直，使液体冲击孔底溅起并裹挟空气。
试剂未充分混匀或温度过低，增加液体表面张力，更易形成稳定气泡。
气泡对实验结果的具体影响
步骤
气泡带来的后果
包被
包被不完全 → 实际包被量下降 → 弱阳性甚至假阴性
封闭
未结合位点残留 → 非特异性结合增强 → 本底增高、出现假阳性
加样/加二抗
抗原抗体不能有效结合 → 反应信号减弱 → 假阴性（竞争法可能为假阳性）
加显色液
显色不完全 → OD值偏低，定量失准
加终止液
① 不能完全终止反应；② 影响酶标仪比色 → OD值异常升高
洗涤
非特异性结合物未被洗净 → 干扰后续反应，相当于“做无用功”
补充说明：即使是微小气泡，也可能局部阻隔反应界面，严重影响检测灵敏度和重复性。
避免气泡的关键操作技巧
方法
操作要点说明
加样位置与手法
尽量靠近孔底但不接触孔底，用力均匀，不要过快过猛
溶液预处理
冻存血清应充分解冻后轻柔混匀（如上下倒置），避免剧烈震荡
封闭与洗涤时加满孔
封闭液和洗涤液必须加满整个孔，有助于气泡自然浮出并被驱除
手工洗板后拍干
吸干水分后用力拍干板子，可帮助去除残留气泡
使用吹风机辅助去泡
用热风（如理发店吹风机）短暂吹拂板面1–2秒，可快速破除顽固气泡（适用于耐热材料）
提示：加样后可轻轻敲击板子数次或将板子水平晃动一圈，帮助气泡上浮排出。
下一步
为最大限度减少气泡干扰，建议：
使用高质量、经过润洗的吸头；
所有试剂提前平衡至室温；
每次加样前确认移液器密封良好，防止漏气导致体积不准；
若使用自动化设备，优化程序中的加样高度和速度参数。
相关新闻资讯
