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发布人:武汉艾美捷科技有限公司
发布日期:2024/7/2 16:07:33
重组PNGase F是从含有Elizabethkingia miricola基因克隆的大肠杆菌菌株中分离得到的。与天然酶(E-PNG01)相比,重组酶在活性或比活性上没有可检测的差异。
PNGase F能够从糖蛋白中切割天冬酰胺连接的(N-连接的)寡糖。PNGase F将天冬酰胺脱氨基化为天冬氨酸,同时保持寡糖完整。变性可以增加切割速率高达100倍。大多数天然蛋白仍然可以被完全N-去糖基化,但需要增加孵化时间。PNGase F在孵化条件下至少能保持72小时的活性。PNGase F不会去除通常在植物糖蛋白中发现的含有Alpha-(1,3)-连接的核心岩藻糖的寡糖;为此,请使用肽N-糖苷酶A。
PNGase F来源:来自大肠杆菌中Elizabethkingia miricola的重组PNGase F基因。
艾美捷QA-Bio-重组PNGase F:
货号:E-RPNG01
EC:3.5.1.52
内容:
60 µl的小包装,包含0.3 U的重组PNGase F,在20 mM Tris-HCl,pH 7.5中
包含20 µL和60 µL包装尺寸
5倍PNGase F反应缓冲液7.5用于PNGase F 250 mM磷酸钠,pH 7.5
PNGase F变性溶液 2% SDS,1 M β-巯基乙醇
PNGase F Triton X-100 15%溶液
比活性 :>25 U/mg
活性: 5 U/ml
分子量 :35,000道尔顿
PNGase F的pH范围: 6-10,Z适pH 7.5
PNGase F建议用法:
向Eppendorf管中加入多达200 µg的糖蛋白。用去离子水调整至35 µl的最终体积。
加入10 µl的5倍PNGase F反应缓冲液7.5和2.5 µl的PNGase F变性溶液。在100˚C加热5分钟。
冷却后,加入2.5 µl的PNGase F Triton X-100并混合。
加入2.0 µl的PNGase F至反应中。在37˚C孵化3小时。
特异性 PNGase F从糖蛋白中切割天冬酰胺连接的(N-连接的)寡糖。PNGase F将天冬酰胺脱氨基化为天冬氨酸,同时保持寡糖完整。变性可以增加切割速率高达100倍。大多数天然蛋白仍然可以被完全N-去糖基化,但需要增加孵化时间。PNGase F在孵化条件下至少能保持72小时的活性。PNGase F不会去除通常在植物糖蛋白中发现的含有Alpha-(1,3)-连接的核心岩藻糖的寡糖;为此,请使用肽N-糖苷酶A。
比活性 定义为在37˚C,pH 7.5下,每分钟催化1微摩尔RNase B释放N-连接寡糖的酶量。通过SDS-PAGE监测切割(切割后的RNase B迁移速度更快)。
储存 将酶储存在4˚C。
QA-Bio-重组PNGase F文献参考:
Bayer, E.A., F. De Meester, T. Kulik and M. Wilchek. Preparation of deglycosylated egg white avidin. Appl Biochem Biotech 53: 1-9 (1995)
Elder, J.H. and S. Alexander. endo-b-N-Acetylglucosaminidase F: endoglycosidase from Flavobacterium meningosepticum that cleaves both high-mannose and complex glycoproteins. Proc Natl Acad Sci USA 79: 4540-4544 (1982)
Tarentino, A .L., C.M. Gomez and T.H. Plummer, Jr. Deglycosylation of asparagine-linked glycans by peptide :N-glycosidase F. Biochemistry 24: 4665-4671 (1985)
Tarentino A.L. and T.H. Plummer. Enzymatic deglycosylation of asparagine -linked glycans: purification, properties, and specificity of oligosaccharide-cleaving enzymes from Flavobacterium meningosepticum. Meth Enzymol 230: 44-57 (1994)
艾美捷科技是QA-Bio的中国代理商,为科研工作者提供优质的产品与服务。
https://www.amyjet.com/news/QA-Bio-new.shtml
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