武汉艾美捷科技有限公司

传统的2-AA和2-AB标记试剂盒在糖苷标记过程中使用氰硼氢化钠作为还原剂。这种试剂是有毒的，因此在操作时应使用通风柜。为了符合新兴的健康和安全法规，用新的VP糖苷试剂盒替换它们，该试剂盒使用的是苯并吡啶硼烷，这是一种明显更安全的还原剂。

QA-Bio-2-AB标记试剂盒包含以下试剂的两套（每个试剂盒可处理15个样本），存放在纯氮气下密封的玻璃安瓿中：

LT-KAB-A2

2-氨基苯甲酰胺（2-AB染料）

二甲基亚砜（DMSO）

醋酸

氰硼氢化钠

LT-KAB-VP24

2-氨基苯甲酰胺（2-AB染料）

二甲基亚砜（DMSO）/醋酸溶液

2-苯并吡啶硼烷

艾美捷QA-Bio-2-AB标记试剂盒：

货号：LT-KAB

样本数量：一个2-AB标记试剂盒包含的试剂足以标记每个试剂盒多达30个独立的分析样本

染料纯度： >99%（高效液相色谱法）

分子量： 137

激发波长： λex 250 nm

发射波长： λem 428 nm

样本量 ：每个样本从25皮摩尔到25纳摩尔的糖苷。

适用样本： 任何具有自由还原末端的纯化糖苷都可以被标记。

结构完整性 ：未检测到（<2摩尔百分比）唾液酸、岩藻糖、硫酸或磷酸的损失。

标记效率 ：通常>85%（取决于样本）。

标记选择性： 基本上是化学计量的标记。

协议：

1.纯化糖苷：LudgerClean EB10柱（LC-EB10-A6）设计用于从蛋白质、盐和洗涤剂中纯化糖苷。

2.将样本转移到反应瓶中：对于从典型糖蛋白中获得的糖苷池，样本量应在100皮摩尔至50纳摩尔的范围内。即使是单一纯糖苷，只要低至5皮摩尔也可以在随后的高效液相色谱（HPLC）分析中被标记和检测。合适的反应瓶包括小型聚丙烯微量离心管和PCR工作用管。

3.干燥样本：如果样本体积超过10微升，则需要将样本干燥。如果需要将样本干燥，则应使用离心蒸发仪进行。如果这不可能，则可以谨慎使用冷冻干燥（真空干燥），特别是要确保样本在管底干燥成一个小的、紧凑的团块。不要将样本暴露于高温（>28°C）或极端pH值，因为这些条件会导致酸性催化的唾液酸损失（高温、低pH）或糖苷还原末端的表观异构化（在高pH值时）。

一旦样本干燥，然后在10微升的水中重新溶解糖苷。

4.（仅限LT-KAB-A2）准备DMSO-醋酸混合物：向DMSO的瓶中加入150微升的冰醋酸，并通过移液管混合。

5.添加染料：将DMSO-醋酸混合物加入2-AB（2-氨基苯甲酰胺酸）染料的瓶中，混合直至染料溶解。

6.添加还原剂：将溶解的染料加入氰硼氢化钠或苯并吡啶硼烷的瓶中，并通过移液管混合，直至还原剂完全溶解，制成最终的标记试剂。

7.将标记试剂加入样本：将标记试剂加入每个干燥的糖苷样本中，盖紧微管，彻底混合。

8.孵化：将反应瓶放入加热块、沙浴或设置在65°C的干燥箱中孵化3小时。在大多数情况下，孵化时间可以缩短至2小时或延长至4小时，而不会显著改变标记反应的结果。

9.离心和冷却：孵化期结束后取出样本，简短离心微管，然后让它们完全冷却至室温。

10.样本清洁：建议在标记后进行样本清洁，以去除多余的染料和其他标记试剂。可以使用LudgerClean T1柱（LC-T1-A6）或S柱（LC-S-A6）进行清洁。

QA-Bio-2-AB标记试剂盒文献参考：

Anumula KR, Dhume ST. High resolution and high sensitivity methods for oligosaccharide mapping and characterization by normal phase high performance liquid chromatography following derivatization with highly fluorescent anthranilic acid. Glycobiology 8 685-694(1998)

艾美捷科技是QA-Bio的中国代理商，为科研工作者提供优质的产品与服务。

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