深圳振强生物技术有限公司

#01

引言

引言：今天分享氨基糖苷类抗生素-阿米卡星相关杂质研究，阿米卡星是一种是氨基糖苷类抗生素，可以作用于细菌体内的核糖体，抑制细菌蛋白质合成，并破坏细菌细胞壁的完整性，致使细菌细胞膜破坏，细胞死亡。适用于革兰阴性杆菌和对青霉素耐药的金黄色葡萄球菌引起的感染。肌肉注射或静脉滴注给药，静脉滴注的半衰期约为2小时，无尿时可长达30小时，很少与蛋白结合。主要引起耳蜗神经损害，耳、肾毒性与庆大霉素相仿。阿米卡星依靠与细菌30S亚基结合，阻断细菌蛋白质合成而起到抗菌作用。

#02

实验方案

实验准备

在本次实验中，我中心参照《中国药典》（2020版）二部“阿米卡星”品种项下“有关物质”检查项下所使用的色谱条件对药典收录监控而且公司有库存现货的2个杂质进行了液相色谱定位研究，查看系统适用性是否符合药典要求。并对阿米卡星的3个代码杂质进行了溶液稳定性研究。所用样品货号，代码及结构式如图1和图2：

图1：杂质货号及结构式

图2：杂质货号和代码对应关系图

阿米卡星系统适用性实验方案

在本次实验中，实验员参照《中国药典》（2020版）二部“阿米卡星”品种项下“有关物质”检查项下所使用的色谱条件，分别取RM-A131100（API; Amikacin CAS: 37517-28-5）、RM-A131101（杂质A; Amikacin EP ImpurityA CAS: 50725-24-1）和RM-A131106（杂质F; Amikacin EP ImpurityF CAS: 197909-67-4）配制成样品溶液，分别进样，然后将三个样品溶液混合，再次进样。根据检测所得色谱图，计算药典杂质A和药典杂质F的RRT，通过比对实验计算所得RRT值与药典规定RRT值确定系统适用性是否符合药典规定。

阿米卡星杂质A&F&RRT 0.32研究方案

在本次实验中，实验员将样品RM-A131101（杂质A）、RM-A131106（杂质F）和杂质RM-A131122（RRT 0.32）各取适量，分别放置在酸性、中性和碱性溶液中，分别于常温常压下放置0、3、6、12、24小时后参照《中国药典》（2020版）二部“阿米卡星”品种项下“有关物质”检查项下所使用的色谱条件进样检测。观测随着样品溶液放置时间的延长，色谱图中主峰峰面积的变化，以此为根据来确定样品的溶液稳定性。

#03

实验结论

阿米卡星系统适用性实验结论

虽然本次研究中色谱柱固定相并未跟药典规定的色谱柱完全一样，但是以《中国药典》（2020版）二部“阿米卡星”品种项下“有关物质”检查项下收录代码为杂质A和杂质F的2个代码杂质作为判定依据，实测相对保留时间和标准中的数据基本相符，所以本实验系统适应性良好。检测色谱图如图3，实验计算所得RRT值与药典规定RRT值比对数据如图4：

图3: 原料药与《中国药典》（2020版）二部“阿米卡星”所收录的杂质A、杂质F的混合进样图谱

图4：实验计算所得RRT值与药典规定RRT值比对数据

阿米卡星杂质A&F&RRT 0.32研究结论

经过检测发现样品RM-A131122（RRT 0.32）在酸性、中性和碱性溶液中放置24小时的过程中主峰峰面积变化不大，相对标准偏差均小于2.0%。所以可以认为此样品在酸性、中性和碱性溶液中放置24小时是比较稳定的。此样品在不同pH值溶液环境下的检测检测数据汇总如下：

图5：RM-A131122溶液稳定性数据汇总图

样品RM-A131101（杂质A）和RM-A131106（杂质F）在酸性和中性溶液中放置24小时的过程中，主峰峰面积变化不大，相对标准偏差均小于2.0%。但是这2个样品在碱性溶液中放置24小时的过程中主峰峰面积变化较大，相对标准偏差均大于2.0%（杂质A主峰峰面积相对标准偏差2.73%，杂质F主峰峰面积相对标准偏差4.59%)，杂质明显增大。所以这2个样品在酸性和中性溶液中比较稳定，在碱性溶液中会发生缓慢降解。这2个样品在不同pH值溶液环境下的检测检测数据汇总如下：

图6：RM-A131101溶液稳定性数据汇总图

图7：RM-A131101溶液稳定性数据3D图

图8：RM-A131106溶液稳定性数据汇总图

图9：RM-A131106溶液稳定性数据3D图

#04

总结

综上所述，通过本次实验，我们发现样品RM-A131122（RRT 0.32）在酸性、中性和碱性溶液中稳定性均较好，样品RM-A131101（杂质A）和RM-A131106（杂质F）在酸性、中性溶液中的稳定性较好，在碱性溶液稳定性较差，会随着放置时间的延长而发生缓慢的降解，在保存和检测过程需要注意，使用中也建议现配现用，不适合做储备液。如果对以上3个样品的稳定性数据有需要，可以向本公司咨询。