胎牛血清

胎牛血清(Fetal Bovine Serum，FBS)是指在健康母牛正常分娩前采集胎牛血液加工而成的血清，由于血清采集时间早，其胎球蛋白较多，血清白蛋白含量高，而γ-球蛋白含量极低，并富含多种生长因子，因此，是培养细胞最为优质的牛血清。

胎牛血清（FBS）是最常用的血清添加剂，因为它富含生长因子、蛋白和大分子。尽管无血清和非动物来源的培养基也逐渐走红，但许多细胞系未必适用，并且存在费用较高和生长较慢等缺点。

血清，指血液凝固后，在血浆中除去纤维蛋白分离出的淡黄色透明液体或指纤维蛋白已被除去的血浆。其主要作用是提供基本营养物质、提供激素和各种生长因子、提供结合蛋白、提供促接触和伸展因子使细胞贴壁免受机械损伤、对培养中的细胞起到某些保护作用。

与其它类型血清相比，胎牛血清含有更多的生长因子，及较少的gamma球蛋白含量。此外，跟新生动物血清和成体动物血清相比，胚胎期血清含有更低浓度的补体。补体具有溶解细胞的副作用，还会干扰免疫检测。

血清是血浆中不含纤维蛋白原的胶状液体,具有维持血液的正常粘度、酸碱度、渗透压等作用。它主要由水和各种化学成分组成,这些化学成分包括白蛋白、α1、α2、β、γ-球蛋白,甘油三酯,总胆固醇,谷丙转氨酶等。血清中含有各种血浆蛋白、多肽、脂肪、碳水化合物、生长因子、激素、无机物等，这些物质对促进细胞生长或抑制生长活性是达到生理平衡的。

许多供应商提供不同等级、不同来源及不同处理的胎牛血清。而胎牛血清是一种复杂的混合物，不同供应商的不同批次产品肯定会有一些不同。因此，有必要建立一套选择、评估胎牛血清的机制。

1. Gibco    目前中国在售正品血清只有澳洲血源的，北美限制进口，南美在两年前停产。
2. Hyclone   血清的高端品牌
3. Corning   血清的高端品牌，来源于Mediatech，澳洲血源的生产工艺和Gibco、hyclone不相上下。
4. sigma SAFC血清  在国内也有很多客户在用，特别是一些大的药厂和疫苗企业，质量比较稳定。
5. Gemini血清  Gemini血清价格相对较便宜，也有部分实验室选择使用。
6. Bioind血清，简称BI血清。
7. EXCELL血清  国产高品质血清的领导品牌，质量还比较稳定，工业客户使用量大。
8. 四季青血清 国内科研实验室使用比较普遍，价格相对实惠，能满足很多常规细胞的培养需求。

四季青、依科赛、思洳

胎牛血清是细胞培养中用量最大的天然培养基，含有丰富的细胞生长必须的营养成份，常用于动物细胞的体外培养，具有极为重要的功能。

1.提供对维持细胞指数生长的激素，基础培养基中没有或量很少的营养物，以及主要的低分子营养物。

2. 提供结合蛋白，能识别维生素、脂类、金属和其他激素等，能结合或调变它们所结合的物质活力。

3.有些情况下结合蛋白质能与有毒金属和热原质结合，起到解毒作用。

4.是细胞贴壁、铺展在塑料培养基质上所需因子来源。

5.起酸碱度缓冲液作用。

6.提供蛋白酶抑制剂，使在细胞传代时使剩余胰蛋白酶失活，保护细胞不受伤害。

胎牛血清是将血清从冷冻箱取出后，先置于2～8℃冰箱使之融解，然后在室温下使之全融。但必须注意的是，融解过程中必须规则地摇晃均匀。 长时间储存在2-8℃时，血清中的各种蛋白和脂蛋白(如冷凝集素、纤维蛋白原、玻粘连蛋白等)可能聚集而形成沉淀或可见的混浊。因此，推荐在-20℃以下储存血清，并避免反复冻融。

胎牛血清的常规处理方式是热钝化，即放在56°水浴30分钟并偶尔晃动血清；选择合适的FBS热钝化温度非常重要，因为把一整瓶冷冻的FBS加热到56°C可能需要花很长时间。其目的是使血清中的补体成分及一些未知的细胞生长抑制分子失活。

胎牛血清的主要来源地就是那些大量养牛的国家，包括美国、澳大利亚、新西兰、加拿大及南美和中美洲地区，由政府机构管理血清制品的生产及收集过程。 胎牛血清分为美国农业部（USDA）级和欧盟级。其中，美国农业部级胎牛血清没有疯牛病（BSE）及口蹄疫（FMD）污染，能够出口到任何国家，而欧盟级胎牛血清只在大部分欧洲国家及亚洲国家销售。

Hyclone 北美特级胎牛血清
这款血清--Hyclone特级胎牛血清(Defined FBS)，有较好的促细胞生长作用及产品稳定性。内毒素含量小于10EU/ml，血红蛋白含量小于10mg/dl。此血清可以广泛用于细胞培养，包含干细胞系的培养。
Gibco北美特级胎牛血清
invitrogen公司在美国原装生产的特级胎牛血清，是100nm过滤3次，内毒素和血红蛋白含量都可以与Hyclone北美特级胎牛血清的相媲美。也可以用于培养大部分的干细胞系。

Hyclone加拿大优等胎牛血清
其中一款血清是Hyclone加拿大优等胎牛血清(Characterizend FBS)，血清采自加拿大，由Hyclone公司总部的员工采集加工，采集方法，加工过程，检定标准与美国原产优等胎牛血清完全一致，市场价格低于美国原产的。经过3次100nm过滤，内毒素含量小于25EU/ml，血红蛋白含量小于25mg/dl。此血清，在2005年以前，是很多实验室选择血清的首选，价格适中，质量过硬，应用细胞非常广泛。
Hyclone澳大利亚优等胎牛血清
基本与加拿大的优等血清是一样的，级别也非常相似，各种级别都有。
Gibco澳大利亚胎牛血清与Hyclone澳大利亚胎牛血清差不多，这一级别的血清，也能用于干细胞培养，可是，不像特级胎牛血清那么优秀。

目前市场上还有一款Hyclone血清是南美胎牛血清(FBS) ，此血清采自南美，在国内(兰州)过滤并测试检验，经三次100纳米过滤，根据中国商标法的规定标贴中文标签，内毒素含量小于等于10EU/ml,血红蛋白含量小于等于20mg/d。此血清广泛用于各种肿瘤细胞的培养，还没有资料记载能够用于干细胞，也听说有少数人用于干细胞培养的，不过，因为本身血红素比较高，所以，最好不要用于干细胞。 国产的胎牛血清，国内没有严格意义的胎牛血清，胎牛血清本身是需要穿刺取血的，而国内都是剖腹产出胎牛，8小时左右取血，然后，进行过滤分装。所以，国产的胎牛血清不是严格意义的胎牛血清。不过也很多实验室使用，具体情况那就看实验的要求了。

胎牛血清一般是在-5°到-20°之间冻存，2°到8°之间融化。一个比较好的办法是，将胎牛血清分装到50ml管中，这样做就避免了反复冻融对血清造成的危害。偶尔一些试管等分的血清在冷冻温度下保持液态。 这是由于缺少成核中心，就是一些引发结晶（冷冻）的颗粒物质。只需用手指轻弹管子，它们就会立即固化。 血清融化后常出现沉淀，可能是血清蛋白变性造成的。简短离心即可除去沉淀，并且，这些沉淀一般不会影响血清质量的。

1 原料采集

甄选国家批准血源地（中国海关总署允许进口的牛血清产地只有澳大利亚、新西兰和乌拉圭），胎牛均来自健康母牛。

①将胎牛直接母体取出：去除胎盘；

②胎牛心脏穿刺取血、采血、接血；

③全封闭无菌采血，原血全程冷链运输。

2 冷冻离心

将原血尽快放入冷冻离心机中离心。收集血清，冻存。

3 成品生产

原血清解冻后，0.1μm三次过滤，避免病原微生物的污染，全程在万级和局部百级净化车间完成。

4 质检

对血清成品均会进行多项的的质量控制检测，不仅涉及全面的理化、微生物检测，也会进行特定的细胞生长以及病毒检测。

5 资质证明

正规渠道的血清需有一系列“身份证明文件”，乌拉圭、澳洲来源血清需我国海关检疫合格才允许入境，进入市场的进口血清必须有《中华人民共和国进口货物报关单》、《中华人民共和国出入境检验检疫入境货物检验检疫证明》、出口国农业部证明、出口许可证等一系列资质文件，确保所有血清均可追溯其来源及母体健康状况。

淡黄色，透明——2小时以内的国产新生牛血清，胆红素含量较少；
金黄色，透明——产下较长时间的新生牛血清，一般超过2小时了；
金黄色，不透明——产下几天或更久的小牛血清；
淡黄色，带一点微红，透明——等级最高的进口胎牛血清，如特级的北美；
淡红色，透明——普通的进口胎牛血清；
红色偏深，透明——普通的进口胎牛血清，南美的居多，采血环节不够严谨；
红色偏暗，透明——普通胎牛血清，保存不好，血红蛋白氧化了；
红色，不透明——进口小牛血清，透明度越差，牛龄越大。

其实北美血清和澳洲血清的质量是差不多的。这个是实践后的结论？有人说 gibco 10099-141质量好，也有人说16000-044质量好，其实论血源地我觉得还是澳洲和新西兰的质量会好一些，但是论制造工艺，我个人认为美国的工艺会好一些，综合的结果就是，质量整体下来会好一些。那为啥澳洲血清的价格会那么高？因为北美血清是中国限制进口的，所以中国只能从澳大利亚进口正规的血清，这样一来，那就澳洲血清的货供不应求了。

南美血清就比较复杂了，现在的南美血清因为便宜受到很多客户的喜爱。南美血清的猫腻在什么地方？有质量国产血清冒充进口南美血清的，有南美和国产兑出来的血清。一般客户养细胞系会用南美血清，所以买到冒充的高仿的等质量不好的血清的话，其实养起来也问题不大。但是，但是，但是 重要的事情说三遍，稳定性很差，用着用着不行了。