兔脂肪干细胞

兔脂肪干细胞可以分化为脂肪细胞、成骨细胞、软骨细胞等，具有促进组织再生和修复的能力。这些干细胞也可以用于治疗一些疾病，如修复组织损伤、治疗缺血性疾病等。此外，脂肪干细胞的移植还可以改善早衰、亚健康等疾病，提高身体的免疫力。 复苏兔脂肪干细胞：将含有细胞悬液的冻存管在37℃水浴中迅速摇晃解冻，加入4mL培养基混合均匀。在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养基后吹匀。然后将所有细胞悬液加入培养瓶中培养过夜（或将细胞悬液加入10cm皿中，加入约8ml培养基，培养过夜）。第二天换液并检查细胞密度。

兔脂肪干细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

（1）弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

（2）加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

（3）按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

（4）将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为类；

（1）兔脂肪干细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰1酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

（2）4 min 1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。

（3）将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。