兔脂肪干细胞

兔脂肪干细胞传代：如果细胞密度达80%-90%，即可进行传代培养。

（1）弃去培养上清，用不含钙、镁离子的PBS润洗细胞1-2次。

（2）加1ml消化液（0.25%Trypsin-0.53mM EDTA）于培养瓶中，置于37℃培养箱中消化1-2分钟，然后在显微镜下观察细胞消化情况，若细胞大部分变圆并脱落，迅速拿回操作台，轻敲几下培养瓶后加少量培养基终止消化。

（3）按6-8ml/瓶补加培养基，轻轻打匀后吸出，在1000RPM条件下离心4分钟，弃去上清液，补加1-2mL培养液后吹匀。

（4）将细胞悬液按1：2比例分到新的含8ml培养基的新皿中或者瓶中。

细胞冻存：待细胞生长状态良好时，可进行细胞冻存。下面T25瓶为类；

（1）兔脂肪干细胞冻存时，弃去培养基后，PBS清洗一遍后加入1ml胰1酶，细胞变圆脱落后，加入1ml含血清的培养基终止消化，可使用血球计数板计数。

（2）4 min 1000rpm离心去掉上清。加1ml血清重悬细胞，根据细胞数量加入血清和DMSO，轻轻混匀，DMSO终浓度为10%，细胞密度不低于1x106/ml，每支冻存管冻存1ml细胞悬液，注意冻存管做好标识。

（3）将冻存管置于程序降温盒中，放入-80度冰箱，2个小时以后转入液氮灌储存。记录冻存管位置以便下次拿取。