人胚肾细胞293T
中文名称:人胚肾细胞293T
英文名称:Human embryonic kidney cell 293T
CAS号:
分子式:
分子量:0
EINECS号:
Mol文件:Mol File
人胚肾细胞293T 用途与合成方法
人胚肾细胞293T是293细胞株插入SV40 T-抗原的温度敏感基因后产生的高转染效率的衍生细胞株。
1)培养皿/瓶用枪头或移液管吸去原培养液;
2)无菌PBS或无菌生理盐水洗涤3次(按培养体积加入);
3)加入适量胰酶消化适当时间(一般胰酶为0.25%;9cm/10cm培养皿和25cm培养瓶,一次加入1mL胰酶。消化时间视细胞类型等多种情况综合考虑,一般如果是细胞株,非原代培养,消化1-2分钟足矣);
4)用枪头吹打数十次(视细胞类型而定。一般细胞株30-50次吧,耗时一般2分钟左右);
5)加入适量体积完全培养基终止胰酶消化(如果是9cm/10cm培养皿和25cm培养瓶,可以加入1mL完全培养基;现在培养瓶(皿)里有2mL溶液)。
6)现在可以将溶液进行分瓶(2mL)。如果是细胞株,直接均分到两个培养瓶(皿)里。如果是原代培养,可以根据消化时间来对细胞进行分离;因此可以将溶液(2mL)都转入新的培养瓶(皿)。
7)将两个培养瓶(皿)补足完全培养基到正常体积(果是9cm/10cm培养皿和25cm培养瓶,为5mL完全培养液)
8)镜下观察。刚刚传代细胞还没贴壁,悬浮在溶液中,呈圆形。一般2h之内会贴壁,如果已经贴壁,根据细胞类型有不同的形态,但通常都不是圆形。
9)镜下观察无误之后,再放入细胞培养箱。培养瓶(皿)放入之前,可以用消毒酒精先擦一下。
10)传代之后,第二天细胞换液一次。当然,也可以视情况而定。
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2020-07-02
人胚肾细胞293T的应用