大鼠主动脉平滑肌细胞

大鼠主动脉平滑肌细胞可以用于法舒地尔对大鼠主动脉平滑肌细胞增殖的影响及Ras-MEK1/2-ERK1/2通路的作用，通过观察法舒地尔对血管平滑肌细胞增殖和迁移的影响并探讨其可能的分子生物学机制。

1、颈椎脱臼处死大鼠，75%酒精浸泡3～5min，无菌条件下打开胸腔，将大鼠左肺向右侧翻转，可见贴于脊柱右侧胸主动脉走行。上端沿主动脉弓，下端至膈的主动脉裂孔处，完整剪取胸主动脉，置于预先装有PBS的无菌培养皿中；

2、用镊子轻轻剥离血管外结缔姐织，移至另一装有PBS的无菌培养皿；

3、用眼科剪沿纵轴剪开血管条，无菌镊轻轻刮除内膜，移至另一无菌培养皿；

4、用镊子钝性加压刮中膜2次，待出现裂口后夹住中膜将其取下；

5、将取下的中膜加入含20%FBS的DMEM培养液，用眼科剪剪碎血管条，使组织块大小约1mm×1mm×lmm;

6、用无菌滴管将组织块吸入细胞培养瓶，均匀铺于瓶壁，间距约0.2～0.5cm;

7、将培养瓶直立放置于37℃/5%CO2细胞培养箱；

8、1h后轻轻放平，37℃/5%CO2细胞培养箱中绝对静置3d;

9、此后每3d换液1次；

10、培养出来的VSMC及时传代及冻存于液氮，3～8代用于后续实验。