小鼠脾淋巴细胞

小鼠脾淋巴细胞分离自脾脏组织；脾脏是机体最大的免疫器官，占全身淋巴组织总量的25%，含有大量的淋巴细胞和巨噬细胞，是机体细胞免疫和体液免疫的中心。成熟淋巴细胞需依赖抗原刺激而分化增殖，继而发挥其免疫功能。 小鼠脾淋巴细胞采用密度梯度离心法制备而来，细胞总量约为5×105/T25方瓶，细胞纯度可达90%以上，且不含有HIV-1、 HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

1、取出T25细胞培养瓶，用75%酒精消毒瓶身，拆下封口膜，放入37"C、5%CO₂、饱和湿度的细胞培养箱中静置3-4h，以稳定细胞状态。

2、细胞处理

1)收集T25细胞培养瓶中的培养基至50ml离心管中，用PBS清洗细胞培养瓶1-2次，收集清洗液；

2) 1200- 1 500rpm离心3min，弃上清，收集细胞沉淀；

3)加 入5ml新鲜完全培养基，用吸管轻轻吹打混匀、分散细胞;将分散好的细胞接种至培养器皿中，置于37°C、 5%CO₂、 饱和湿度的细胞培养箱中静置培养；

4)待细胞状态稳定后， 培养观察;之后每隔2-3天更换新鲜的完全培养基。