小鼠脾淋巴细胞

小鼠脾淋巴细胞

采用密度梯度离心法从C57BL/6小鼠的脾淋巴细胞来源血液或组织中分离免疫细胞，经 NH₄Cl 裂解红细胞后，接种于未包被培养皿中，使用 RPMI-1640 培养基（含 10% FBS、1% 双抗及 10 ng/mL M-CSF/G-CSF）培养；通过流式细胞术检测 CD11b、F4/80（大鼠）、CD14、CD86 等巨噬细胞/免疫细胞标志物表达，结合 MTT 增殖实验和吞噬功能实验（荧光微球吞噬 assay）验证免疫细胞活性与功能。

产品名称：小鼠脾淋巴细胞

英文名称： Mouse Splenic Lymphocytes

组织来源： 脾脏

默认种属 ：昆明小鼠

产品规格：5×10^5Cells/T25

方法简介  实验室分离的小鼠脾淋巴细胞采用机械研磨法结合密度梯度离心法制备而来。

质量检测  实验室分离的小鼠脾淋巴细胞，不含有HIV-1、HBV、HCV、支原体、细菌、酵母和真菌等。

培养基：  小鼠脾淋巴细胞完全培养基(含FBS、生长添加剂、Penicillin、Streptomycin等)

换液频率： 每2-3天换液一次

生长特性： 悬浮

细胞形态： 圆形

传代比例： 不传代

传代特性： 不增殖；不传代

消化液： 0.25%胰蛋白酶

小鼠脾淋巴细胞体外培养周期有限；建议使用配套的专用生长培养基及正确的操作方法来培养，以此保证该细胞的最佳培养状态。

复苏准备：小鼠脾淋巴细胞专用完全培养基、无菌 PBS，准备 15mL 离心管，淋巴细胞对胰酶不依赖，无需胰酶消化液，试剂 37℃水浴回温，超净台紫外灭菌 30min，备好无菌耗材，检查冻存管完好。

冻存管水浴解冻：液氮取出冻存管，快速浸入 37℃水浴，轻晃 1‑2min，大部分冰晶融化，残留微小冰屑即可取出，75% 酒精擦拭管壁，移入超净工作台。

稀释离心除冻存剂：无菌打开冻存管，细胞悬液缓慢滴加到装有 4mL 预热淋巴细胞完全培养基的离心管，轻柔吹打混匀，1000r/min 离心 5min，沉降悬浮淋巴细胞，去除 DMSO 冻存上清。

重悬接种铺瓶：离心完毕弃上清，加入 2mL 脾淋巴细胞完全培养基，轻柔吹打重悬细胞沉淀，打散细胞团，淋巴细胞为悬浮细胞，将悬液转移至 T25 培养瓶，补加培养基，轻轻晃动混匀细胞。

恒温箱静置孵育：培养瓶平稳放置于 37℃、5% CO₂饱和湿度培养箱，静置孵育 24h，悬浮细胞，不需要贴壁，避免剧烈摇晃。

换液镜检：24h 后收集瓶内全部细胞悬液，离心弃旧培养基，PBS 轻洗细胞沉淀，加入预热新鲜完全培养基重悬，回种培养瓶，放回培养箱，每日镜检细胞活率，排查微生物污染。

传代扩增：细胞密度升高后，收集全部细胞悬液，细胞计数，离心，用新鲜完全培养基重悬，按照合适细胞密度分瓶继续悬浮培养，不进行胰酶消化操作。

1.全程操作需在超净工作台内无菌条件下进行，任何污染风险均可能导致实验失败。

2.培养表面需用纤维连接蛋白(10ug/ml)或层粘连蛋白包被，室温孵育2小时。

3.该细胞对培养条件较为敏感，建议初次培养时设置多个平行实验以提高成功率。

4.补充10ug/ml胰岛素、5ug/ml转铁蛋白和2nM三碘甲腺原氨酸(T3)。

5.该细胞传代比例为1:2至1:3，每3-4天换液一次，避免过度融合影响细胞状态。