植物线粒体膜蛋白提取试剂盒

1.样本采集前处理：无论田间自然生长还是实验室组织培养，采摘前须避光生长24-48小时，以减少叶片组织中糖类及叶绿体含量。取适量Lysis Buffer，加入0.5%β-巯基乙醇，10ml Lysis Buffer加入50ulβ-巯基乙醇，混匀，形成Lysis Buffer/β-巯基乙醇溶液，此溶液可2-8度保存一个月。

2.叶片用蒸馏水清洗2-3次，滤纸吸干，有条件请用液氮研磨叶片1-2克，研磨完后，取800mg左右研磨的叶片粉，加入1.5ml预冷的Lysis Buffer/β-巯基乙醇溶液，混匀。如果无条件（无液氮），请预冷研钵，取洗过的叶片1000 mg，用剪刀剪为碎块放入玻璃匀浆器或者研钵中。加入1.5ml预冷的Lysis Buffer/β-巯基乙醇溶液，冰上研磨至看不见明显组织块；

3.将研磨物放置合适的离心管，4℃，1000×g离心5 min；

4.将上清转移到一新的离心管中，在沉淀中加入0.5ml Lysis Buffer/β-巯基乙醇溶液，混匀，再次4℃，1000×g离心5 min，取上清；合并两次上清，将上清4℃1000×g再次离心5 min。

5．取上清，加入一新的离心管中，4℃，16,000×g离心10 min。离心后的上清含胞浆成分，可从中提取胞浆蛋白。将上清转移到新离心管，线粒体沉淀在管底。

6.在线粒体沉淀中加入0.5 mL Wash Buffer重悬线粒体沉淀，4℃，1000×g离心5 min；

7．取上清，加入一新的离心管中，4℃，16,000×g离心10 min。弃上清，高纯度的线粒体沉淀在管底；

8.用50-100μL Store Buffer或合适的反应缓冲液重悬线粒体沉淀，立即使用或-70℃保存。