植物线粒体膜蛋白提取试剂盒

植物线粒体膜蛋白提取试剂盒可用于从植物叶片组织中分离出完整而纯化的线粒体。适合于田间采摘或者实验室培养的植物叶片中线粒体的制备。其制备物，可以被用于细胞凋亡、信号传递、代谢和蛋白组学等的研究。但不适用于进一步DNA提取。

1.样本采集前处理：无论田间自然生长还是实验室组织培养，采摘前须避光生长24-48小时，以减少叶片组织中糖类及叶绿体含量。取适量Lysis Buffer，加入0.5%β-巯基乙醇，10ml Lysis Buffer加入50ulβ-巯基乙醇，混匀，形成Lysis Buffer/β-巯基乙醇溶液，此溶液可2-8度保存一个月。

2.叶片用蒸馏水清洗2-3次，滤纸吸干，有条件请用液氮研磨叶片1-2克，研磨完后，取800mg左右研磨的叶片粉，加入1.5ml预冷的Lysis Buffer/β-巯基乙醇溶液，混匀。如果无条件（无液氮），请预冷研钵，取洗过的叶片1000 mg，用剪刀剪为碎块放入玻璃匀浆器或者研钵中。加入1.5ml预冷的Lysis Buffer/β-巯基乙醇溶液，冰上研磨至看不见明显组织块；

3.将研磨物放置合适的离心管，4℃，1000×g离心5 min；

4.将上清转移到一新的离心管中，在沉淀中加入0.5ml Lysis Buffer/β-巯基乙醇溶液，混匀，再次4℃，1000×g离心5 min，取上清；合并两次上清，将上清4℃1000×g再次离心5 min。

5．取上清，加入一新的离心管中，4℃，16,000×g离心10 min。离心后的上清含胞浆成分，可从中提取胞浆蛋白。将上清转移到新离心管，线粒体沉淀在管底。

6.在线粒体沉淀中加入0.5 mL Wash Buffer重悬线粒体沉淀，4℃，1000×g离心5 min；

7．取上清，加入一新的离心管中，4℃，16,000×g离心10 min。弃上清，高纯度的线粒体沉淀在管底；

8.用50-100μL Store Buffer或合适的反应缓冲液重悬线粒体沉淀，立即使用或-70℃保存。

线粒体(Mitochondria)是细胞呼吸的主要场所，细胞活动所需的能量主要由在线粒体内进 行的氧化所产生的能量来供应，制备线粒体的关键是保持线粒体的完整性和纯度，可通过分级分 离法获得，即低速去除细胞核以及细胞碎片，再进行高速梯度离心分离线粒体,跨膜蛋白承担 各种生物功能，在生物的各种发展过程中扮演重要角色。植物线粒体膜蛋白提取试剂盒可从植物样本中提取线粒体膜蛋白，操作简单快捷， 可在 40-45min 内完成操作，含有蛋白酶抑制剂，可以有效抑制蛋白的降解，并维持原有的蛋 白间相互作用，该试剂盒主要用