质粒中量提取试剂盒

质粒中量提取试剂盒用碱裂解法从培养菌中提取质粒DNA，1 h内可完成单个样本的抽提工作，采用独特的溶液配方和内毒素清除试剂，只需要几次简单离心去除蛋白质、多糖、内毒素、RNA等杂质，获得高质量的质粒DNA。纯化DNA的OD260/280通常在1.8左右，得到的质粒可直接应用于细胞转染甚至动物体内实验等对DNA纯度要求很高的工作中。纯化后期过程均在1.5 mL小离心管中操作，方法简单，不需特殊设备，无需过柱，不用酚氯仿抽提；基本可完全回收细菌裂解释放出的质粒，不必担心质粒DNA的丢失。

使用质粒中量提取试剂盒提取纯化质粒DNA，对质粒损伤小，即使是10 kb甚至100 kb以上的大型质粒或超大型BAC/PAC质粒，只要碱裂解法能够提取，就可以有效纯化。可选择任意小体积溶解质粒，浓度可高达5 μg/μL。超螺旋比例可高达95%，无内毒素，转染效果好。

质粒中量提取试剂盒的推荐使用量及产量：高拷贝质粒推荐使用量50-70 mL，得率可多达150-600 µg左右；低拷贝质粒或大于10 kb的大质粒，应适当增加菌体量，同时按比例增加P1、P2、PⅢ的用量。

质粒中量提取试剂盒的使用注意事项：

1.首次使用时，将试剂盒所带的全部RNase A加入溶液P1后（终浓度100 μg/mL）置于4℃保存。如果溶液P1中RNase A失活，提取的质粒可能会有微量RNA残留，在溶液P1中补加RNase A即可。

2.环境温度低时溶液P2中SDS可能会析出浑浊或者沉淀，可在37℃水浴加热帮助溶解，不要剧烈摇晃，以免形成过量泡沫。

3.避免试剂长时间暴露于空气中产生挥发、氧化、pH值变化，各溶液使用后应及时盖紧瓶盖。

4.提取大质粒时操作动作要轻柔，应该使用剪大了开口的吸头，防止机械剪切对DNA的损坏。