AML12

通过电子显微镜，小鼠肝细胞表现出典型的肝细胞特征，例如过氧化物酶体和胆小管样结构。AML12细胞保留表达血清（白蛋白，α1抗胰蛋白酶和转铁蛋白）和间隙连接（连接蛋白26和32）蛋白的高水平mRNA的能力，并且仅包含乳酸脱氢酶的同工酶5。细胞表达高水平的人TGFα和较低水平的小鼠TGFα。肝特异性蛋白的表达随培养时间的延长而降低，但会通过在无血清培养基中生长细胞而重新激活。

1.断头处死成年小鼠，充分放血后迅速无菌取出肝脏组织，置于缓冲液中；

2.首先将肝组织剪成5mm边长的组织块，使用缓冲液洗涤2-3遍，然后进一步将肝组织剪碎成1mm3的组织小块，使用缓冲液冲洗直至上清澄清；

3.组织块转移至50ml离心管内，加入10ml消化液，37%，静置消化1h，间隔15min摇动1次；

4.消化完全后使用巴氏滴管反复吹打消化产物30次，消化物分别过80目、200目细胞筛，收集滤液；

5.1000rpm，室温离心8min，收集细胞，使用基础培养基重悬细胞；

6.600rpm，离心5min，重复离心纯化2次，细胞经台盼蓝染色，计数，按1x106/25cm2的细胞数分瓶，使用完全培养基+20%FBS进行培养。

7.18h后换液，以后每天换液。