弗氏不完全佐剂

免疫佐剂是指某些物质，先于抗原或与抗原同时注射时，可增强机体对该抗原的特异性免疫反应，即起辅佐抗原，增强抗原性，从而得到较高效价的抗体的作用。免疫佐剂(immunogenic adjuvant)是疫苗研究的热点之一，氢氧化铝作为迄今惟一的一种人用佐剂已成功地用于乙型肝炎病毒等病毒性疾病的疫苗中。免疫佐剂是非特异性的免疫增强剂，它与抗原一起或预先注射机体，能增强机体对抗原的免疫应答。
弗氏免疫佐剂是目前常用的一类免疫佐剂，分为不完全佐剂和完全佐剂。弗氏不完全佐剂是将抗原水溶液与油剂(石蜡油或花生油)等量混合，再加上乳化剂(羊毛脂或吐温80)，制成油包水乳剂，可提高抗体水平，且持续时间长。弗氏完全佐剂是在弗氏不完全佐剂中加入死卡介苗，它可刺激单核巨噬细胞系统增生，增加抗体产量和对抗原的摄取。弗氏完全佐剂中的死卡介苗可刺激T细胞引起免疫反应。该佐剂是由美籍匈牙利细菌学家JulesThomas Freund(1891—1960)发明的，故以其名子命名。因该佐剂中含分枝杆菌，故又称为分枝杆菌佐剂。不含分枝杆菌者为弗氏不完全佐剂。 免疫佐剂是指与抗原混合后注入动物体内，能增强抗原性和机体免疫应答的一类物质。免疫佐剂的作用：
①能使弱抗原物质增强抗原性；
②增加特异性循环抗体水平，或产生有效的保护性免疫；
③改变所产生的循环抗体类型；
④增强细胞介导的超敏反应能力；
⑤保护抗原(特别是DNA、RNA)不受体内酶的分解。
佐剂对某些分子量小的多糖或多肽抗原性微弱的物质，尤能增强其产生特异性反应的作用。 弗氏完全佐剂是一种油包水的乳浊液，能够非常有效的诱导产生高滴度的抗体。弗氏完全佐剂含结核分枝杆菌的细胞壁成分，可以加强对抗原的抗体反应。佐剂活性来自于油滴中免疫原的持续释放，并刺激局部免疫反应。弗氏不完全佐剂用于初次免疫刺激。为了减少副作用，不含结核分枝杆菌成分的弗氏不完全佐剂用于加强免疫。 弗氏佐剂是现在动物实验中最常用的佐剂，分为不完全弗氏佐剂和完全弗氏佐剂。不完全弗氏佐剂是液体石蜡与羊毛脂混合而成，组分比为1～5：1，可根据需要而定，通常为2：1。不完全佐剂中加卡介苗(最终浓度为2～20mg/ml)或死的结核分枝杆菌，即为完全弗氏佐剂（FCA）。一般首次注射时用1／2体积FCA加上1／2体积的抗原进行乳化，第二次或第三次注射时用不完全佐剂或不用佐剂。如不加佐剂，则抗原量增大10-20倍。
配制方法：按比例将羊毛脂与石蜡油置容器内，用超声波使之混匀，高压灭菌，置4℃下保存备用。
在免疫动物前，先将弗氏佐剂与抗原按一定比例混合，佐剂和抗原体积比一般为1：1，制备成"油包水"乳状液。因为含SDS很易促使其乳化成油包水抗原乳化复合物，注射入动物体内时一定要保持乳化状态。抗原用量视抗原分子量不同及免疫原性及免疫动物不同而有一定差异，无统一标准和固定模式。一般是每兔（约2kg重）或每羊（约20kg重）第1次注射抗原1mg，以后逐次增加抗原量，最多每次不超过3mg。
佐剂与抗原乳化可按如下方法进行：
（1）研磨法：先将佐剂加热并取适量放入无菌的玻璃研钵内，待冷却后再缓缓滴入等体积的抗原溶液，边滴边按同一方向研磨，滴加抗原的速度要慢。待抗原全部加入后，继续研磨一段时间，使之成为乳白色粘稠的油包水乳剂。本法适于制备大量的佐剂抗原，缺点是研钵壁上粘附大量乳剂，抗原损失较大。
（2）注射器混合法：将等量的弗氏佐剂和抗原溶液分别吸入两个注射器内，两注射器之间以一细胶管相连，注意排净空气，然后交替推动针管，直至形成粘稠的乳剂为止。本法优点是容易做到无菌操作，抗原损失少，适用于制备少量的抗原乳剂。但同时难以乳化完全，个别抗原，用塑料注射器根本推不动，而用玻璃注射器又有渗漏。制备好的乳化剂经鉴定才能适用。鉴定方法是将乳化剂滴入冷水中，若保持完整不分散，成滴状浮于水面，即乳化完全，为合格的油包水剂。
（3）超声：实验室条件好点的，比如说有超声破碎仪的，一定要控制超声频率和时间，超声容易激发一些自由基，对抗原有未知损害。乳化方法要根据抗原和需要而定。 1、弗氏佐剂可用于制备免疫原的油包水乳液。由于抗原释放缓慢，油包水乳液中的抗原可刺激高效长期的抗体应答。
2、弗氏完全佐剂中的分枝杆菌可将巨噬细胞和其他细胞吸引到注射部位，从而增强免疫应答。鉴于此原因，将弗氏完全佐剂用于初始注射，而将弗氏不完全佐剂用于随后的加强注射。
3、Sigma公司的弗氏完全佐剂规格：产品编号：F5506；每毫升含0.85mL石蜡油和0.15mL二缩甘露醇一油酸。
有关弗氏不完全佐剂的信息由Chemicalbook的彤彤编辑整理（2015-09-21）。