兔抗鼠IGG抗血清 用途与合成方法
兔抗鼠IGG血清也称兔抗鼠IGG抗血清,是将鼠IGG抗原分子分别以弗氏完全佐剂(油包水溶性抗原分子)或弗氏不完全佐剂,及水剂相结合的剂型免疫注射于兔子等实验动物的不同部位,产生高效价抗体后,经无菌低温分离制成。
免疫血清可广泛的应用于医学、生物学的各个学科,特别在临床免疫测定和免疫病理的诊断中更是必备之材。
(1)抗原乳化:称取羊毛脂10g于研钵中,、逐滴加入石腊油40ml,逐滴研磨,高压灭菌后备用。将上述不完全福氏佐剂预热至60℃,取3ml,逐滴加入0.5ml BCG(75mg/ml),继续加入2.5ml人C3蛋白(2.4mg/ml),边滴入边研磨,直至达到“油包水”状态。
(2)动物免疫:选取健康新西兰兔(3Kg左右),消毒局部皮肤,用1ml注射器吸取1ml乳化抗原,于兔每只脚掌皮下注入0.5ml。间隔2周后,将1ml乳化抗原多点(5-10点)注入兔腘窝及背部皮下。间隔2周后,在1周内分别3次通过兔耳静脉注射2.4mg/ml人C3蛋白液(分别为0.1ml、0.3ml、0.5ml),间隔1周后采用双向免疫扩散测定抗血清效价,当效价达到1:16以上即可放血。
(3)放血:可采用颈动脉放血法和心脏采血法。
(4)鉴定:采用双向免疫扩散或ELISA测定抗血清效价。
(5)保存:抗血清收获后,加1/万硫柳汞或1/万的叠氮钠防腐,或加入等量的中性甘油,分装小瓶,置-20℃以下的低温保存,数月至数年内抗体效价无明显变化。注意避免反复冻融。也可将抗血清冷冻干燥后保存。
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2020-06-15
兔抗鼠IGG血清应用