绿脓菌素测定用培养基(PDP)基础

蛋白胨和甘油提供碳氮源；氯化镁和硫酸钾促进绿脓色素和荧光素的产生；琼脂是培养基的凝固剂。

称取本品49.4g,另称取10g甘油,溶解于1000ml蒸馏水中,分装,121℃高压灭菌15分钟,备用。

用于环丙沙星体外诱导对铜绿假单胞菌QS基因调控影响的研究
通过不同浓度的环丙沙星对敏感的铜绿假单胞菌（Pseudomonas aeruginoisa,PA）进行体外诱导,探讨不同的浓度及诱导时间对铜绿假单胞菌耐药性、毒力因子和群体感应（quorum sensing,QS）相关基因的影响,进而探索环丙沙星在诱导过程中是否参与了QS对毒力因子的调控,为临床合理使用喹诺酮类药物提供依据。
方法:1.实验菌株的选择:将临床分离的铜绿假单胞菌非重复性菌株40株经VITEK-2重新鉴定,通过测定菌株对环丙沙星的最低抑菌浓度（minimal inhibitory concentrations,MICs）,筛选出对环丙沙星敏感的菌株,最后选择其中来源于无菌体液和伤口分泌物的菌株与PAO1一起组成本研究的实验菌株。
2. 环丙沙星体外诱导实验:根据各实验菌株对环丙沙星的MICs值,将各菌株分别接种于相应的0.5×MIC,1×MIC,2×MIC和4×MIC四个浓度的含环丙沙星琼脂培养皿中,共传代培养5天,其中诱导1天时的菌株定义为1代菌,诱导2天则定义为2代菌,依次类推。分别保存其中1、3、5代菌株备用。
3. 耐药性的测定及统计分析:采用琼脂倍比稀释法测定所有保存的菌株对环丙沙星的MICs,统计不同诱导浓度及不同时间的耐药率变化。MICs经lg转化后采用重复测量方差分析的方法研究不同浓度的环丙沙星诱导5代对铜绿假单胞菌MICs的影响。P<0.05则差异有统计学意义。
结果:实验菌株的选择:课题组前期收集的40株非重复性铜绿假单胞菌的标本类型主要以痰标本26株（65%）为主,其次还有伤口分泌物5株（12.5%）、尿3株（7.5%）和血2株（5%）等。标本来源于临床各住院科室,其中分离到最多的是ICU 7株（17.5%）和呼吸科7株（17.5%）,其次还有血液科6株（15%）、神经科5株（12.5%）和骨科5株（12.5%）等。40株菌中有31株对环丙沙星敏感（77.5%）,其中来源于无菌体液和伤口分泌物中的菌株共11株,与PAO1共同构成实验菌株12株。

方法：挑取可疑菌落接种在在绿脓菌素测定用培养基（PDP）斜面上，培养24小时，观察斜面有无色素。如有色素，在试管内加氯仿3.0～5.0mL，充分震摇，使培养物中的绿脓菌素提取在氯仿中，待氯仿提取液呈现绿色时，加1mol/L盐酸约1mL，震摇后静置片刻，上层盐酸溶液中呈现粉红至红色实验结果为阳性，否则为阴性。
绿脓杆菌，又称铜绿假单胞菌（学名：Pseudomonas aeruginosa），1882年首先由Gersard从伤口脓液中分离到，是一种革兰氏阴性菌、好氧、呈长棒形的细菌，只有单向的运动性。它是一种机会性感染细菌，且对植物亦是机会性感染的，感染后因脓汁和渗出液等病料呈绿色。
绿脓杆菌，广泛分布于自然界及正常人皮肤、肠道和呼吸道，是临床上较常见的条件致病菌之一。
原理：铜绿假单胞菌能产生的绿脓菌素能被氯仿提取，且在水中溶解度比氯仿大，并且会发生可逆的氧化还原反应，氧化时碱性呈蓝色，酸性呈红色。所以加入盐酸溶液并震摇后，绿脓菌素会由氯仿转移至盐酸溶液中，并在酸性环境中呈红色。