cDNA文库构建
cDNA文库构建是将mRNA在体外反转录成cDNA,与适当质粒载体连接后转化受体菌,进行繁殖扩增。最终获得包含组织或细胞全部mRNA信息的cDNA克隆群体。cDNA文库构建经典方法是用Oligo(dT)作逆转录引物,或者用随机引物,给所合成的cDNA加上适当的连接接头,连接到适当的载体中获得文库。其基本步骤包括:RNA的提取(例如异硫氰酸胍法,盐酸胍—有机溶剂法,热酚法等等,提取方法的选择主要根据不同的样品而定),要构建一个高质量的cDNA文库,获得高质量的mRNA是至关重要的,所以处理mRNA样品时必须仔细小心。
2020-02-19
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