植物甾醇酯的含量检测

背景及概述^[1][2]

植物甾醇具有降低血浆总胆固醇和低密度脂蛋白胆固醇的效果。由于植物甾醇的水溶性和油溶性均不理想，而酯化后能明显提高在食用油和脂肪中的溶解度，甾醇酯能够在人体内转化成甾醇和脂肪酸，植物甾烷醇酯在肠道中的水解率达到90％，所以其具有植物甾醇和脂肪酸两部分的生理功能。植物甾烷醇酯主要有β－谷甾醇酯，植物甾醇酯，菜油甾醇酯三类，目前，植物甾醇酯主要应用于涂抹食品和色拉调料中。植物甾醇酯制品已经获得FDA“一般认为安全(GRAS)”的认可，成为功能性食品的一种发展方向。

含量检测^[1]

步骤如下：

(1)取含植物甾醇酯的待测样品1mL，加入到约40mL溶剂乙酸乙酯中，超声波(100W)处理5min后，用乙酸乙酯定容至50mL，植物甾醇酯完全溶解于乙酸乙酯中，得到植物甾醇酯待测液(相当于3.75mg/mL的植物甾醇酯)；

(2)将200μL植物甾醇酯待测液和100μL质量浓度为0.0015％的磷硫铁显色剂混合摇匀后，室温下显色25min，得到显色液；

(3)取200μL的显色液至于酶标仪中进行检测，测得待测样品的吸光光度值；

(4)取100mg植物甾醇酯标准样品置于烧杯中，加入80mL乙酸乙酯，超声处理至溶解完全，转移至100mL容量瓶中用乙酸乙酯定容，得到植物甾醇酯标准品待测液，超声5min可完全溶解；

使用时，吸取上述植物甾醇酯标准品待测液10mL，用乙酸乙酯定容至100mL，得到植物甾醇酯使用液A，其浓度为100μg/mL。吸取上述待测液20mL，用乙酸乙酯定容至100mL，得到植物甾醇酯使用液B，其浓度为200μg/mL。

按表1分别添加植物甾醇酯使用液A或B，并振荡。然后，在室温下显色25min，在492nm下用酶标仪测定其吸光度(A)，以植物甾醇酯浓度为横坐标，吸光度(A)为纵坐标，绘制标准曲线。

表1植物甾醇酯标准曲线制作的试剂添加情况

所得标准曲线如图1所示，植物甾醇酯浓度与吸光度值的关系为：y＝0.0051x+0.0667，R²＝0.9974，浓度范围为25～125μg/mL。

(5)将步骤(3)中待测样品的吸光光度值代入步骤(4)的线性回归方程中，得到待测样品中植物甾醇酯的含量，结果测得甾醇酯含量为(76.4±0.7)μg/mL。

制剂^[2]

植物甾醇酯微胶囊的制备方法如下:

1.水相壁材溶液的配制：

称取阿拉伯胶溶解在温度60℃500mL去离子水中，加入麦芽糊精溶解，在温度60℃条件下水浴静置30min，再加入蔗糖酯混合均匀，制成水相壁材溶液。水相壁材溶液中阿拉伯胶的质量为32.33g（其质量分数为4.31%），麦芽糊精的质量为48.53g（其质量分数为6.47%），蔗糖酯的质量为6.00g（其质量分数为0.8%）；

各组分的质量分数=[各组分质量/(总固形物质量+溶剂质量)]×100%；

2、油相芯材溶液的配制：

在植物甾醇酯中加入单甘酯，混合均匀，制成油相芯材溶液。油相芯材溶液中植物甾醇酯的质量为161.70g（其质量分数为21.56%），单甘脂的质量为1.50g（其质量分数为0.2%）；

3、超声波辅助混合：

将水相壁材溶液和油相芯材溶液在温度60℃的水浴条件下混匀，超声波辅助搅拌5min，得混合溶液。混合溶液中油相芯材溶液和水相壁材溶液的质量比为1:0.5；

4、高剪切乳化：

用高剪切乳化机将所制得的混合溶液进行乳化，剪切转速为10000r/min，时间为5min，得乳化液；

5、高压均质：

将乳化液用高压均质机在压力为35MPa条件下，均质2次；

6、喷雾干燥：

将高压均质后的乳化液在175℃进风温度、60℃进料温度、5 ml/min进料泵速、350 L/h空气流量的条件下喷雾干燥；

7、筛分：

将喷雾干燥制得的粉末过100目筛，即可得植物甾醇酯微胶囊产品。

合成^[3]

一种植物甾醇酯的高效合成及分离方法，步骤如下：

(1)将植物甾醇、脂肪酸与催化剂混合，经酯化反应后得到植物甾醇酯粗品；

所述的催化剂以Cu(NO₃)₂为活性组分，纳米羟基磷灰石为载体；

(2)将步骤(1)得到的植物甾醇酯粗品过滤后，与结晶溶剂按摩尔比为1～1:10混合，经吸附脱色，然后在-18～10℃下冷却结晶18～30h，得到所述的植物甾醇酯；

主要参考资料

[1] [中国发明] CN201910085592.4 一种利用酶标仪准确检测植物甾醇酯含量的方法

[2] [中国发明] CN201310332851.1 一种植物甾醇酯微胶囊的制备方法

[3] [中国发明,中国发明授权] CN201410387486.9 一种植物甾醇酯的高效合成及分离方法