洋橄榄叶素的检测方法

概述^[1]

盐霉素(Salinomycin)是由白色链霉菌经发酵产生的聚醚类动物专用抗生素，具有防治动物球虫病和促进畜禽生长发育的功能，被广泛地用于国内外的畜牧业中。但是，在盐霉素产品中，如果发酵工艺或菌种发生变化，将会有洋橄榄叶素的伴生，当含量超出一定限度，将对饲养对象产生不良反应，一定程度上会影响盐霉素的使用效果。  

检测方法^[1]

CN201510431874.7提供一种高效液相色谱测定盐霉素中洋橄榄叶素的方法， 通过供试品与标准品保留时间的对比，同时利用峰面积外标法进行洋橄榄叶素的定性与定量检测。

一种高效液相色谱测定盐霉素中洋橄榄叶素的方法，采用如下色谱条件：

色谱柱：(C18，5um)色谱柱；

流动相：以水、磷酸、乙腈、甲醇的体积比360～440:9～11:450～550:81～99为流动相，所述磷酸浓度为2mol/L；

流速：0.8～1.2ml/min

检测波长：240nm～270nm

柱温：35～45℃

优选的，所述流动相中水、磷酸、乙腈、甲醇的体积比为40:1:50:9。

优选的，检测条件中流速为1.00ml/min，检测波长为254nm，柱温为40℃。

检测方法通过以下步骤实现：

(1)洋橄榄叶素标品溶液配制：取洋橄榄叶素标准品用甲醇配制成溶液，过0.22μm滤膜，备供试标品溶液用；

(2)盐霉素样品溶液配制：取盐霉素样品用甲醇配制成溶液，过0.22μm滤膜，备供试 样品溶液用；

(3)取相同体积的供试标品和样品溶液，注入高效液相色谱仪，按照权利要求1-3中任一项所述的条件进行高效液相色谱分析；

用峰面积外标法计算相关物质含量：

式中：A样为样品中洋橄榄叶素的峰面积；

A标为洋橄榄叶素标准品的峰面积；C标为标准品溶液浓度。

优选的，将所述洋橄榄叶素标品配制成10μg/ml溶液，盐霉素样品配制成10mg/ml的溶液。

本发明的有益效果在于：1)色谱条件相对简单，不需要梯度洗脱，也不需要衍生反应； 样品制备相对简单省事，不需要固相萃取，这样可以节约成本、提高检测效率；2)测试准确度高，样品加标的回收率可达到95％～98％；3)精度高，日内精密度，RSD小于1％；日间精密度，RSD小于2％；4)有很好的线性相关性，在0.2μg/ml～20μg/ml的浓度范围内，相关系数R2可达0.99985；5)灵敏度高，样品检测的定量限可达35ppm(S/N＝10)，检测限可达10ppm(S/N＝2)。可以实现对含洋橄榄叶素大于10ppm的样品直接进行检测，样品不需固相萃取、富集，使样品的处理简单化；6)专属性强，测试过程不受其它成分的干扰，与其它 成分的分离度可达2.0以上；对洋橄榄叶素峰进行纯度测定，纯度指数为正；7)耐用性好，色谱条件的微小变化，不影响测试的准确性。

主要参考资料

[1] [中国发明] CN201510431874.7 一种高效液相色谱测定盐霉素中洋橄榄叶素的方法