对叶百部碱(标准品)的主要应用

背景及概述^[1]

百步是止咳平喘药。出《本草经集注》)。见《肘后备急方》。又名嗽药、百条根。为百部科植物蔓生百部Stemonajaponica(Bi.)Miq.，直立百部Stemonasessilifolia(Miq.)Franch.etSav.或对叶百部StemonatuberosaLour.等的块根。春季新芽出土前及秋季苗将枯萎时挖取，拣净杂质，除去须根，洗净，润透后晒干用或蜜炙用。主产山东、安徽、江苏、浙江、福建、江西、四川等地。甘、苦，微温；有小毒。入肺经。功能温润肺气，止咳，杀虫。主治：①寒咳，与麻黄、杏仁等配伍。②肺劳久咳，与紫菀、贝母、葛根、石膏、竹叶等配伍。③虫疾，对畜禽体虱、虱卵、皮肤疥癣及蛲虫均有杀灭作用。牛、马15～30克；猪、羊3～9克。为末或煎汤灌服。外用，煎水洗或研末调敷。块根含多种生物碱。蔓生百部根含百部碱(stemonine)、百部定碱(stemonidine)、异百部定碱(isostemonidine)等；直立百部根含百部碱(ste-monine)、原百部碱(protostemonine)、百部定碱(iso-semonidine)等；对叶百部根含百部碱(stemonine)、对叶百部碱(tulerostemonine)、异对叶百部碱(isotu-berostemonine)等。煎剂和乙醇浸剂体外试验对肺炎球菌、乙型溶血型链球菌、金黄色葡萄球菌等球菌；对痢疾杆菌、伤寒杆菌、大肠杆菌及某些致病性真菌均有抑制作用。百部水浸剂及乙醇浸剂对蚊蝇幼虫、虱子、臭虫、孑孓、蛲虫等均有杀灭作用。

应用^[2]

1.镇咳祛痰

百部的传统应用为止咳和祛痰，现代药理学研究结果与传统用法得到相互印证。体内实验证明百部通过降低呼吸中枢兴奋性，抑制咳嗽反射而具有良好的镇咳、延长咳嗽潜伏期的作用。研究发现百部属植物块根乙醇提取物对氨雾引起小鼠咳嗽的止咳活性强弱依次为：直立百部、蔓生碱百部、对叶百部；其中直立百部接近阳性药物可待因；直立百部乙醇提取物的不同提取组分的止咳活性按照脂溶性组分、总苷、多糖、总碱的顺序依次递减。采用豚鼠枸橼酸引咳动物模型表明：对叶百部的主要止咳活性成分是生物碱，其中新对叶百部碱的止咳活性与可待因相当，新斯替宁碱的活性稍弱于新对叶百部碱。同时提出吡咯并氮杂薁类母核结构是百部止咳的关键。对叶百部种内差异较大，具有以金刚大碱、百部新碱、新对叶百部碱和对叶百部碱为主峰的四种化学类型，其中金刚大碱和百部新碱型的对叶百部有较强的止咳活性。研究表明金刚大碱的止咳作用机理是通过中枢神经系统介导，其余三种生物碱是通过外周神经系统介导。采用小鼠氨水引咳法比较药典收载3种百部的止咳活性，发现对叶百部＞直立百部＞蔓生百部。采用相同模型研究对叶百部生品不同部位的止咳活性，结果表明生品各部位均具明显活性。采用序贯法比较不同产地对叶百部总生物碱的止咳活性，结果表明不同来源对叶百部活性差异明显，其中广西恭城、凤山和靖西组止咳作用显著。采用豚鼠枸橼酸模型对广西不同产地对叶百部进行了止咳活性研究，广西东兴产对叶百部是质量地区。有祛痰实验表明［药典收载的3种百部的祛痰作用明显，以对叶百部碱活性最强。

2.抗菌、抗病毒作用

百部水煎剂及醇浸剂、醇提物对大肠杆菌、金黄色葡萄球菌和绿脓杆菌有明显抑制作用。对叶百部对革兰氏阳性菌有显著的抑制作用，对人型结核杆菌亦有完全抑制作用。蔓生百部水煎剂对皮肤真菌如堇色毛癣菌、许兰氏黄癣菌、奥杜盎氏小芽孢癣菌、羊毛样小芽孢癣菌、星形奴卡氏菌等有抑制作用。此外，生物碱单体如对叶百部碱对水霉菌的抑制作用强于蛇床子素。现代研究表明百部中非生物碱类化合物也有抗微生物的作用，如茋类化合物有抗柑桔黑腐病、燕麦镰孢、稻瘟病菌、灰霉病、蜡叶芽枝霉菌等芽枝菌活性。百部水浸液可抑制痘苗病毒天坛株和新城疫病毒Ⅰ系弱毒株。从蔓生百部中分离得到的绿原酸类化合物具有中度的体外抑制禽流感病毒AIV(H5N1)的活性。

3.其他治疗作用

百部中分离得到的去氢苯并呋喃醇类物质具清除DPPH自由基的抗氧化活性，与α－tocopherol相当。百部尚具有松弛支气管平滑肌的作用。直立百部水提取物可解除由碳酰胆碱、组胺和氯化钾引起的豚鼠气管平滑肌痉挛，其IC50值分别为(2.0±0.1)、(41.2±0.8)和(18.6±0.9)mg/mL。从对叶百部中分离得到的3，5－二羟基－4－甲基联苯在浓度为10mg/mL时对P388瘤株及肝癌细胞株的抑制率分别为99.7%和83.6%。从对叶百部的根中分离得到stilbosteminB3'－β－D－glucopyranoside、stilbosteminH3'－β－D－glucopyranoside和stilbosteminI2″－β－D－glucopyranoside三个二苄基苷类化合物具有保护人成神经细胞瘤SH－SY5Y细胞的活性。百部的非生物碱成分可在体外逆转P－糖蛋白介导的肿瘤多药耐药性，可用于具多药耐药癌症的相关治疗。此外，百部有一定的中枢镇静、镇痛作用。

制备^[3]

一种对叶百部碱的提取方法，包括如下步骤：

(1)取2kg百部中草药，进行物理性的粉碎；

(2)用4升95％的乙醇溶液回流3小时，提取两次，进行抽提；

(3)取抽提液进行浓缩至干；

(4)将浓缩液采用D101大孔吸附树脂柱(3kg)，柱直径12㎝，3升40％甲醇溶液进行洗脱；

(5)收集含对叶百部碱部分浓缩于200ml无水乙醇，加入3ml氢碘酸成盐，0度冷却结晶过夜，然后过滤，烘干，得到7克对叶百部碱提取物。

本方法得到的对叶百部碱的纯度达到98.55％；分子式C22H33NO4；分子量：375.506；外观：白色针状结晶；溶解性：溶于甲醇，乙醇，乙酸乙酯，微溶于石油醚，不溶于水；稳定性：TLC检测方法：氯仿：甲醇＝10：1，碘化铋钾喷涂显色；HPLC检测方法：乙腈：水＝45：55，检测波长210nm。

主要参考资料

[1] 中国农业百科全书·中兽医卷

[2] 百部药理作用与临床应用研究进展

[3] CN201810706218.7一种对叶百部碱的提取方法